目的制備人的抗苗勒管激素（AMH）免疫磁珠及酶標(biāo)抗體,初步建立一種基于納米磁珠的雙抗體夾心ELISA快速檢測(cè)方法。方法構(gòu)建人AMH重組蛋白表達(dá)載體,表達(dá)和純化AMH重組蛋白,將獲得的重組蛋白免疫BALB/c小鼠,制備多克隆抗體。通過聚乙二醇將脾細(xì)胞與骨髓瘤Sp2/0細(xì)胞融合,采用ELISA篩選陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株,體內(nèi)腹水誘生法制備抗體,結(jié)合Western blot法評(píng)價(jià)單克隆抗體。利用蛋白A（Protein A）對(duì)抗體進(jìn)行親和層析純化,將多克隆抗體作為捕獲抗體偶聯(lián)至納米級(jí)羧基聚合物磁珠,以高碘酸鈉法對(duì)單克隆抗體進(jìn)行辣根過氧化物酶標(biāo)記作為抗體探針,建立并優(yōu)化基于納米磁珠的雙抗體夾心ELISA。結(jié)果獲得一株具有良好特異性的抗AMH單克隆抗體,其亞型為IgG2b,純化的多克隆抗體和單克隆抗體的效價(jià)均可達(dá)1∶51 200。與磁珠偶聯(lián)后的捕獲抗體以及酶標(biāo)記后的探針抗體仍然具有較好的活性。建立的方法可在1 h左右檢測(cè)出AMH抗原,檢測(cè)下限在50 ng/mL左右。結(jié)論制備的AMH免疫磁珠能夠用于重組AMH的檢測(cè),具有快速、可視化的優(yōu)點(diǎn)。 

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 人AMH重組蛋白的誘導(dǎo)與純化
        1.2.2 AMH多克隆抗體的制備及鑒定
        1.2.3 AMH單克隆抗體的制備及鑒定
        1.2.4 抗體純化及其效價(jià)測(cè)定
        1.2.5 免疫磁珠的制備及驗(yàn)證
        1.2.6 酶標(biāo)抗體的制備及其最佳工作濃度的確定
        1.2.7 快速檢測(cè)方法的建立及其最佳反應(yīng)時(shí)間
        1.2.8 靈敏度檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
2 結(jié)果
    2.1 人AMH重組蛋白的獲得與鑒定
    2.2 小鼠多抗血清的鑒定
    2.3 單克隆抗體制備及其特性鑒定
    2.4 抗體的純化與效價(jià)測(cè)定
    2.5 免疫磁珠與酶標(biāo)抗體的鑒定
    2.6 最佳反應(yīng)時(shí)間優(yōu)化
    2.7靈敏度評(píng)價(jià)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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