目的制備人的抗苗勒管激素（AMH）免疫磁珠及酶標抗體,初步建立一種基于納米磁珠的雙抗體夾心ELISA快速檢測方法。方法構(gòu)建人AMH重組蛋白表達載體,表達和純化AMH重組蛋白,將獲得的重組蛋白免疫BALB/c小鼠,制備多克隆抗體。通過聚乙二醇將脾細胞與骨髓瘤Sp2/0細胞融合,采用ELISA篩選陽性雜交瘤細胞株,體內(nèi)腹水誘生法制備抗體,結(jié)合Western blot法評價單克隆抗體。利用蛋白A（Protein A）對抗體進行親和層析純化,將多克隆抗體作為捕獲抗體偶聯(lián)至納米級羧基聚合物磁珠,以高碘酸鈉法對單克隆抗體進行辣根過氧化物酶標記作為抗體探針,建立并優(yōu)化基于納米磁珠的雙抗體夾心ELISA。結(jié)果獲得一株具有良好特異性的抗AMH單克隆抗體,其亞型為IgG2b,純化的多克隆抗體和單克隆抗體的效價均可達1∶51 200。與磁珠偶聯(lián)后的捕獲抗體以及酶標記后的探針抗體仍然具有較好的活性。建立的方法可在1 h左右檢測出AMH抗原,檢測下限在50 ng/mL左右。結(jié)論制備的AMH免疫磁珠能夠用于重組AMH的檢測,具有快速、可視化的優(yōu)點。 

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 人AMH重組蛋白的誘導與純化
        1.2.2 AMH多克隆抗體的制備及鑒定
        1.2.3 AMH單克隆抗體的制備及鑒定
        1.2.4 抗體純化及其效價測定
        1.2.5 免疫磁珠的制備及驗證
        1.2.6 酶標抗體的制備及其最佳工作濃度的確定
        1.2.7 快速檢測方法的建立及其最佳反應(yīng)時間
        1.2.8 靈敏度檢測實驗
2 結(jié)果
    2.1 人AMH重組蛋白的獲得與鑒定
    2.2 小鼠多抗血清的鑒定
    2.3 單克隆抗體制備及其特性鑒定
    2.4 抗體的純化與效價測定
    2.5 免疫磁珠與酶標抗體的鑒定
    2.6 最佳反應(yīng)時間優(yōu)化
    2.7靈敏度評價
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3726756