目的分析結(jié)核分枝桿菌蛋白Rv2986c的結(jié)構(gòu)與功能,并進行原核表達。方法從NCBI Genbank數(shù)據(jù)庫獲取Rv2986c蛋白氨基酸序列,利用ExPASY ProtParam、Protscaleon expasy、TMHMM Server v.2.0以及SOPMA等軟件對Rv2986c蛋白的生物學(xué)性質(zhì)進行分析。用pGEX-6p-1-Rv2986c重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大腸埃希菌（E.coil）BL21 （DE3）中表達Rv2986c,并使用GST親和層析柱進行純化。結(jié)果結(jié)核分枝桿菌Rv2986c蛋白由214個氨基酸組成,分子式為C₉₇₅H₁₇₀₇N₃₁₉O₂₆₆S₁,等電點（pI）為11.95,屬于穩(wěn)定、親水性蛋白,無跨膜區(qū);二級結(jié)構(gòu)α-螺旋（Hh）占51.40%,無規(guī)則卷曲（Cc）占35.05%。重組質(zhì)粒pGEX-6p-1-Rv2986c轉(zhuǎn)染DE3后表達相對分子質(zhì)量約為51×10~3的重組蛋白Rv2986c,經(jīng)GST親和層析柱純化得到單一電泳條帶的目的蛋白。結(jié)論生物信息學(xué)方法預(yù)測了結(jié)核... 

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【文章目錄】：
材料與方法
    1 材料
    2 方法
        2.1 Rv2986c蛋白的生物信息學(xué)分析
            2.1.1 Rv2986c蛋白的一般理化性質(zhì)分析
            2.1.2 Rv2986c蛋白的疏水性分析
            2.1.3 Rv2986c蛋白的跨膜區(qū)預(yù)測
            2.1.4 Rv2986c蛋白的二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
            2.1.5 Rv2986c蛋白的抗原性鑒定
        2.2 Rv2986c蛋白的原核表達及純化
            2.2.1 pGEX-6p-1-Rv2986c重組質(zhì)粒的酶切驗證
            2.2.2 GST-Rv2986c重組蛋白的表達
            2.2.3 GST-Rv2986c重組蛋白的純化
結(jié)果
    1 Rv2986c蛋白的生物信息學(xué)分析
        1.1 Rv2986c蛋白的一般理化性質(zhì)
        1.2 Rv2986c蛋白的疏水性
        1.3 Rv2986c蛋白的跨膜區(qū)
        1.4 Rv2986c蛋白的二級結(jié)構(gòu)
        1.5 Rv2986c蛋白的抗原性
    2 Rv2986c蛋白的原核表達及純化
        2.1 pGEX-6p-1-Rv2986c原核表達載體的驗證
        2.2重組蛋白的誘導(dǎo)表達
        2.3 重組蛋白的親和純化
討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]炎癥小體在結(jié)核分枝桿菌感染中的作用研究進展[J]. 劉麗婷,吳利先,王國富.  中國病原生物學(xué)雜志. 2019(07)
[2]結(jié)核分枝桿菌Rv2986c對小鼠樹突狀細胞成熟和功能的影響[J]. 孫妍,王心倩,吳啟航,趙隆麒,李海波,占衛(wèi)紅,張舒林,余曉麗.  免疫學(xué)雜志. 2017(12)
[3]結(jié)核分枝桿菌感染與巨噬細胞凋亡的免疫機制研究進展[J]. 師清博,趙明明,王春鳳,錢愛東.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2017(09)
[4]結(jié)核病細胞免疫特征研究進展[J]. 李麗.  中國免疫學(xué)雜志. 2017(06)
[5]結(jié)核分枝桿菌與巨噬細胞相互作用的研究進展[J]. 王旭東,吳利先.  中國病原生物學(xué)雜志. 2015(06)
[6]結(jié)核病疫苗研制的免疫優(yōu)化策略及新疫苗研究進展[J]. 范小勇,李忠明,朱亞峰.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2013 (01)
[7]T淋巴細胞亞群在結(jié)核感染免疫反應(yīng)中的作用[J]. 張慧潔,陳蘭舉,陳名武.  實用兒科臨床雜志. 2006(19)

博士論文
[1]結(jié)核抗原持續(xù)刺激致T細胞耗竭實驗研究及亞單位疫苗LT70-DPC的研發(fā)[D]. 劉勛.蘭州大學(xué) 2016



本文編號：3708371