目的:構(gòu)建編碼DCP-IhC-ProDer f1嵌合基因的原核表達(dá)載體pET28a（+）-DCP-IhC-ProDer f1并進(jìn)行大規(guī)模誘導(dǎo)表達(dá)和純化,用JAK 2抑制劑AG-490阻斷JAK2/STAT3信號通路,探討用重組蛋白DCP-IhC-ProDer f1免疫治療過敏性哮喘小鼠時對JAK2/STAT3信號通路的影響。方法:1、合成特異性DC細(xì)胞分子結(jié)合肽peptides 3（FYPSYHSTPQRP）、MHCⅡ伴隨分子Ii的第1-110序列的基因片段以及粉塵螨Ⅰ類變應(yīng)原ProDer f1中的前肽序列,采用分子生物學(xué)技術(shù)將該三種基因片段連接形成DCP-IhC-ProDer f1基因片段,并將該基因片段插入到大腸桿菌表達(dá)載體pET28a（+）中,形成原核表達(dá)重組載體pET28a（+）-DCP-IhC-ProDer f1,最后通過限制性內(nèi)切酶雙酶切和基因測序的方法對其進(jìn)行驗(yàn)證;2、將構(gòu)建好的重組載體pET28a（+）-DCP-IhC-ProDer f1轉(zhuǎn)入到大腸桿菌表達(dá)菌株E.coli BL21（DE3）中,先用小劑量誘導(dǎo)劑IPTG對重組基因進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),探索出最佳表達(dá)條件后進(jìn)行大規(guī)... 

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 DCP-Ihc-ProDer f1 嵌合肽疫苗原核表達(dá)載體的構(gòu)建和表達(dá)
    1 研究目的
    2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 方法
    3 結(jié)果
        3.1 重組載體pET28a(+)-DCP的鑒定
        3.2 重組質(zhì)粒pET28a(+)-IhC的雙酶切及測序鑒定
        3.3 重組質(zhì)粒pET28a(+)-ProDer f1的雙酶切及測序鑒定
        3.4 重組質(zhì)粒pET28a(+)-DCP-IhC-ProDer f1的雙酶切鑒定及測序結(jié)果
        3.5 重組蛋白DCP-IhC-ProDer f1的SDS-PAGE分析
        3.6 DCP-IhC-ProDer f1蛋白的純化
        3.7 純化的DCP-IhC-ProDer f1蛋白濃度測定
    4 討論
第二部分 JAK2/STAT3信號通路在DCP-IhC-ProDer f1 嵌合肽疫苗特異性免疫治療中作用的探討
    1 研究目的
    2 材料和方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 方法
    3 結(jié)果
        3.1 小鼠癥狀與體征
        3.2 血清中特異性抗體Ig G_(2a)和IgE的含量的變化
        3.3 各組肺泡灌洗液中細(xì)胞因子的變化
        3.4 肺組織病理觀察
        3.5 肺組織中p-JAK2、p-STAT3蛋白的情況
    4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 塵螨重組變應(yīng)原疫苗的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
附錄
作者簡介及讀研期間主要科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]經(jīng)MHC-Ⅱ通路的粉塵螨Ⅰ類變應(yīng)原ProDer f 1疫苗設(shè)計(jì)及其免疫治療效果評價[D]. 劉志明.皖南醫(yī)學(xué)院 2014
[3]變應(yīng)性鼻炎沖擊免疫治療的安全性及有效性研究[D]. 盧川.南方醫(yī)科大學(xué) 2013



本文編號：3699642