目的探討大鼠肉瘤同源基因A/Rho相關(guān)螺旋卷曲蛋白激酶（RhoA/ROCK）信號(hào)通路在腫瘤壞死因子α（TNF-α）促進(jìn)單核細(xì)胞增生性李斯特（Lm）感染致內(nèi)皮細(xì)胞通透性升高的調(diào)控作用。方法培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）分為未感染細(xì)胞對(duì)照組、 TNF-α處理組（100 ng/mL TNF-α處理2 h）、 Lm感染組（以MOI=10的Lm感染2 h,加入慶大霉素殺菌0.5 h）、 TNF-α處理的Lm感染組（Lm感染組細(xì)胞加入100 ng/mL TNF-α處理2 h）、 Y-27632聯(lián)合TNF-α處理的Lm感染組（細(xì)胞用50μmol/L ROCK抑制劑Y-27632處理30 min,再如上進(jìn)行Lm感染和TNF-α刺激）。Western blot法檢測(cè)HUVEC的RhoA、閉鎖小帶蛋白1（ZO-1）、閉合蛋白（occludin）、 ROCK蛋白水平,檢測(cè)辣根過(guò)氧化物酶（HRP）滲漏量分析HUVEC通透性變化,用異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽染色檢測(cè)纖維型肌動(dòng)蛋白（F-actin）細(xì)胞骨架的改變。結(jié)果 TNF-α可降低Lm感染的內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接蛋白ZO-1、 occludin的... 

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 HUVEC培養(yǎng)和細(xì)菌培養(yǎng)
        1.2.2 HUVEC分組和處理
        1.2.3 Western blot法檢測(cè)HUVEC的RhoA、 ROCK和ZO-1、 occludin蛋白表達(dá)
        1.2.4 HRP通透率實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HUVEC通透性
        1.2.5 FITC標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽檢測(cè)HUVEC的細(xì)胞骨架分布
        1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 TNF-α刺激Lm感染的HUVEC其ROCK、 RhoA蛋白表達(dá)增加, ZO-1、 occludin蛋白表達(dá)降低
    2.2 TNF-α刺激Lm感染的HUVEC通透性增強(qiáng)
    2.3 TNF-α刺激Lm感染的HUVEC的細(xì)胞骨架重排
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]腦脊液TNF-α、IL-6、NSE在小兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染中的診斷價(jià)值[J]. 世淑蘭,楊艷飛,李榮杰,楊俊逸,馮星星,李小娟,周百靈,奎莉越,杜廷義.  國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志. 2018(12)
[2]TNF-α聯(lián)合FLAIR序列對(duì)新生兒化膿性腦膜炎的診斷價(jià)值[J]. 張艷麗,孫曉琳,武軍,孫愛榮.  中國(guó)婦幼健康研究. 2017(11)



本文編號(hào)：3694514