目的構(gòu)建和原核表達(dá)布魯氏菌膜蛋白Omp2a,并進行抗原性鑒定。方法將布魯氏菌外膜蛋白Omp2a基因連接到pET-30α原核表達(dá)載體上,轉(zhuǎn)化到大腸埃希菌菌株BL21內(nèi)。重組蛋白rOmp2a經(jīng)IPTG誘導(dǎo),親和層析純化后用SDS-PAGE凝膠電泳分離,確定目的蛋白的大小和表達(dá)豐度。通過Western blot與患者血清反應(yīng),確定重組rOmp2a的抗原性及診斷價值。結(jié)果成功構(gòu)建布魯氏菌外膜蛋白Omp2a的原核表達(dá)系統(tǒng),測序表明閱讀框架正確。用IPTG可誘導(dǎo)高表達(dá)Omp2a,SDS-PAGE顯示其分子質(zhì)量單位為38.4 ku,且其表達(dá)蛋白以包含體形式存在。Western blot顯示rOmp2a能被布魯氏菌感染患者血清識別,而不與細(xì)粒棘球絳蟲和單純皰疹病毒感染者血清反應(yīng)。結(jié)論大腸埃希菌原核表達(dá)系統(tǒng)可高效表達(dá)不可溶的rOmp2a蛋白,該蛋白具有反應(yīng)原性,對布魯氏菌感染患者具有潛在的診斷價值。 

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    1 材料
        1.1主要試劑
        1.2細(xì)菌及載體質(zhì)粒
    2方法
        2.1 Omp2a表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建
        2.2表達(dá)質(zhì)粒的克隆與鑒定
        2.3重組蛋白的表達(dá)和純化
        2.4表達(dá)蛋白的免疫反應(yīng)性檢測
結(jié) 果
    1 目的基因的構(gòu)建
    2 目的基因的克隆表達(dá)
    3 重組Omp2a蛋白的表達(dá)及鑒定
    4 重組Omp2a的反應(yīng)原性鑒定
    5 重組Omp2a的交叉反應(yīng)原性鑒定
討論


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3692928