流感病毒歸屬于正粘病毒科,H3N2是根據(jù)病毒顆粒包膜表面的病毒蛋白血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）的抗原性進(jìn)行分類的病毒亞型。流感病毒除感染人類外,還可以感染鳥和豬。通過不同種類的亞型進(jìn)行基因重組,H3N2可以增強致病力,導(dǎo)致全球范圍內(nèi)的爆發(fā)性流行。例如甲型H1N1流感（2009 pdmH1N1）是由H3N2和H1N1重組,在2009年全世界范圍內(nèi)引起巨大的恐慌,造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此,研究流感病毒的特性和病理性對公眾健康非常的重要。流感病毒主要感染上呼吸道表皮細(xì)胞,除此外還可以感染吞噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞。流感病毒可引起宿主的先天和獲得性免疫反應(yīng)。通過被感染的宿主細(xì)胞模式識別受體TLR7和RIG-I識別,流感病毒可以激活干擾素和炎癥因子的表達(dá),例如IL-6、IL-8和TNF-α等,行使抗病毒功能。除此外流感病毒還有自己的一套免疫逃逸機制,例如通過NS1蛋白阻止NF-κB通路和Ⅰ型干擾素的激活和表達(dá)。本文主要通過篩選流感病毒H3N2感染中表達(dá)譜發(fā)生變化的miRNA,研究并證明miRNA靶定的下游基因,以及兩者的負(fù)反饋調(diào)節(jié)在病毒介導(dǎo)的宿主免疫反應(yīng)中的作用機制。實驗的方法包括采用生物信息學(xué)... 

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：博士

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中文摘要
Abstract
1. 引言
    1.1 流感病毒簡述
        1.1.1 流感與流感病毒
        1.1.2 A型流感病毒的基因組結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特性
        1.1.3 A型流感病毒的復(fù)制周期
    1.2 流感病毒與機體免疫
        1.2.1 識別與逃逸
        1.2.2 細(xì)胞因子的誘導(dǎo)與產(chǎn)生
    1.3 MicroRNA簡介
        1.3.1 MicroRNA的定義
        1.3.2 MicroRNA的產(chǎn)生
        1.3.3 MicroRNA的機制
        1.3.4 MicroRNA與病毒誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 流感病毒株
        2.1.2 細(xì)胞系與菌株
        2.1.3 質(zhì)粒
        2.1.4 小分子干擾RNA
        2.1.5 實驗試劑
        2.1.6 儀器設(shè)備
        2.1.7 引物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細(xì)胞系的培養(yǎng)
        2.2.2 質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.3 轉(zhuǎn)染
        2.2.4 Luciferase活性檢測
        2.2.5 基因的mRNA表達(dá)的分析
        2.2.6 Western Blot
        2.2.7 統(tǒng)計學(xué)分析
3 實驗結(jié)果
    3.1 miR-302a對流感病毒H3N2侵染的影響
        3.1.1 基因芯片篩選
        3.1.2 驗證miR-302a的表達(dá)
        3.1.3 miR-302a參與流感病毒H3N2的復(fù)制
        3.1.4 miR-302a mimics促進(jìn)流感病毒H3N2的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄
        3.1.5 miR-302a inhibitors抑制流感病毒H3N2的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄
    3.2 IRF5為miR-302a的靶標(biāo)基因
        3.2.1 生物信息學(xué)預(yù)測
        3.2.2 雙熒光色素酶檢測
        3.2.3 IRF5的mRNA表達(dá)檢測
        3.2.4 IRF5的蛋白質(zhì)水平檢測
        3.2.5 流感H3N2侵染下miR-302a與IRF5的表達(dá)
    3.3 IRF5基因調(diào)控流感病毒H3N2的復(fù)制
        3.3.1 過表達(dá)IRF5抑制流感病毒H3N2的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄
        3.3.2 下調(diào)IRF5表達(dá)促進(jìn)流感病毒H3N2的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄
    3.4 miR-302a/IRF5對流感病毒介導(dǎo)的宿主免疫反應(yīng)的影響
        3.4.1 IRF5參與流感病毒介導(dǎo)的宿主免疫反應(yīng)
        3.4.2 miR-302a通過調(diào)控IRF5參與流感病毒介導(dǎo)的宿主免疫反應(yīng)
    3.5 miR-302a/IRF5對TLR7細(xì)胞通路的調(diào)控
        3.5.1 IRF5參與TLR7而非TLR3細(xì)胞通路
        3.5.2 miR-302a調(diào)控TLR7細(xì)胞通路
4 討論
5 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3674050