目的獲得穩(wěn)定高表達(dá)人GPC3的SK-Hep-1細(xì)胞系。方法構(gòu)建人GPC3真核表達(dá)載體pc DNA3. 1-GPC3,通過電穿孔的方法轉(zhuǎn)染至SK-Hep-1細(xì)胞,利用G418進(jìn)行細(xì)胞篩選,獲得穩(wěn)定高表達(dá)GPC3的細(xì)胞系。再利用Western blot和流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行鑒定,分析穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞表面GPC3蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果成功構(gòu)建的真核表達(dá)質(zhì)粒pc DNA3. 1-GPC3,檢測(cè)發(fā)現(xiàn)SK-Hep-1細(xì)胞G418最佳篩選濃度為700μg/m L,利用該濃度G418篩選轉(zhuǎn)染SK-Hep-1細(xì)胞,獲得了細(xì)胞表面能夠穩(wěn)定高表達(dá)人GPC3蛋白的SK-Hep-1細(xì)胞系。結(jié)論建立高表達(dá)人GPC3蛋白的SK-Hep-1穩(wěn)定細(xì)胞系,為研究靶向GPC3肝癌抗體提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。 

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 主要試劑與儀器
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.1 pcDNA3.1-GPC3質(zhì)粒構(gòu)建與鑒定
        1.3.2 SK-Hep-1細(xì)胞最佳G418篩選濃度的確定
        1.3.3 SK-Hep-1細(xì)胞電轉(zhuǎn)及篩選
        1.3.4 Western blot檢測(cè)GPC3蛋白表達(dá)情況
        1.3.5 流式檢測(cè)細(xì)胞表面GPC3表達(dá)情況
2 結(jié)果
    2.1 GPC3的合成及表達(dá)載體構(gòu)建
    2.2 重組真核表達(dá)質(zhì)粒鑒定
    2.3 SK-Hep-1細(xì)胞最佳G418篩選濃度確定
    2.4 Western blot檢測(cè)GPC3的表達(dá)
    2.5 流式細(xì)胞檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞表面GPC3的表達(dá)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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