目的:探討鸚鵡熱衣原體（Chlamydia psittaci,Cps）T3SS分泌蛋白SINC與宿主細(xì)胞自噬和凋亡的關(guān)系以及MAPK/ERK信號通路在其中的調(diào)控作用,有助于進一步闡明Cps致病機制。方法:構(gòu)建pET-30a（+）/SINC重組質(zhì)粒,并轉(zhuǎn)化E.coli BL21菌株,0.1mM IPTG誘導(dǎo)表達并純化獲得SINC蛋白。BCA法測定SINC重組蛋白濃度,并經(jīng)多粘菌素B去內(nèi)毒素處理。western blot檢測不同濃度（2、4、6、8、10μg/ml）的SINC刺激HeLa細(xì)胞和RAW 264.7細(xì)胞24h和最佳濃度SINC刺激兩種細(xì)胞不同時間（0、6、12、24、36h）后自噬蛋白LC3-II、Becin-1、Bax和Bcl-2的水平,并用間接免疫熒光法檢測SINC蛋白刺激兩種細(xì)胞后LC3的水平,透射電鏡檢測自噬特殊結(jié)構(gòu),Hoechst33258染色檢測細(xì)胞凋亡率。用最佳濃度SINC刺激兩種細(xì)胞不同時間（0、5、15、30、60、120min或者0、6、12、18、24、36h）后,western blot檢測ERK1/2的磷酸化;用50μM ERK1/2抑制劑U0126預(yù)... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要中英文縮寫
第1章 緒論
第2章 實驗材料
    2.1 主要儀器和設(shè)備
    2.2 載體、菌株及細(xì)胞株
    2.3 主要試劑盒
    2.4 主要實驗試劑
    2.5 其他
第3章 實驗方法
    3.1 pET-30a(+)/SINC原核表達載體的構(gòu)建及鑒定
    3.2 重組SINC蛋白的制備
    3.3 SINC蛋白與細(xì)胞自噬的關(guān)系
    3.4 MAPK/ERK信號通路對SINC蛋白介導(dǎo)細(xì)胞自噬的影響
    3.5 SINC蛋白與細(xì)胞凋亡的關(guān)系
    3.6 MAPK/ERK信號通路對SINC蛋白介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響
    3.7 統(tǒng)計學(xué)處理
第4章 實驗結(jié)果
    4.1 SINC的 PCR擴增
    4.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
    4.3 SINC蛋白的表達及純化
    4.4 SINC蛋白與細(xì)胞自噬的關(guān)系
    4.5 MAPK/ERK信號通路對SINC蛋白介導(dǎo)細(xì)胞自噬的影響
    4.6 SINC蛋白與細(xì)胞凋亡的關(guān)系
    4.7 MAPK/ERK信號通路對SINC蛋白介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻
附錄
綜述
    參考文獻
科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Occurrence of Chlamydia spp.in wild birds in Thailand[J]. Suksai Parut,Onket Rattanaporn,Wiriyarat Witthawat,Sangkachai Nareerat,Lekcharoen Paisin,Sariya Ladawan.  Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2019(02)
[2]自噬在沙眼衣原體持續(xù)感染中的可能作用[J]. 邵麗麗,郭媛麗,劉全忠.  中國皮膚性病學(xué)雜志. 2016(12)
[3]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與白癜風(fēng)[J]. 梅奕潔,孫樂棟.  中國皮膚性病學(xué)雜志. 2015(10)
[4]MAPK/ERK信號通路參與沙眼衣原體抑制TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[J]. 杜昆,李琦,周名,潘暉.  中國皮膚性病學(xué)雜志. 2014(05)

碩士論文
[1]JAK/STAT3信號通路在鸚鵡熱嗜衣原體抑制細(xì)胞凋亡中的作用[D]. 孫源彬.南華大學(xué) 2016
[2]沙眼衣原體pORF5質(zhì)粒蛋白對HeLa細(xì)胞自噬與凋亡的影響[D]. 楊曉玉.南華大學(xué) 2015



本文編號：3644338