目的:研究神經(jīng)軸突導向因子Netrin-1對煙曲霉菌（Aspergillus fumigatus,A.fumigatus）感染的真菌性角膜炎發(fā)病機制的作用及對角膜上皮細胞增殖和遷移的影響。方法:1、煙曲霉菌感染C57BL/6小鼠角膜,建立小鼠真菌性角膜炎動物模型,用PCR法、Western blot法及免疫熒光法檢測小鼠正常角膜和感染后1天、3天、5天角膜中Netrin-1 mRNA和蛋白的表達;用PCR法檢測小鼠正常角膜和感染后1天、3天、5天角膜中Netrin-1受體A2BAR mRNA的表達。2、重組蛋白Netrin-1預處理后建立小鼠真菌性角膜炎動物模型,觀察小鼠角膜感染后臨床評分;用PCR法和Western blot法檢測Netrin-1預處理前后感染角膜中IL-1β、TNF-α、IL-10 mRNA和蛋白的表達;采用免疫熒光法及MPO法檢測Netrin-1預處理前后感染角膜中中性粒細胞的數(shù)量變化。3、煙曲霉菌刺激RAW264.7細胞,PCR法、Western blot法檢測正常細胞及煙曲霉菌刺激后4小時、8小時、12小時細胞中Netrin-1 mRNA和蛋白的表達;PCR法... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abtract
引言
材料與方法
    1 實驗材料
        1.1 實驗對象
        1.2 實驗主要試劑和耗材
        1.3 實驗主要儀器和設備
    2 實驗方法
        2.1 煙曲霉菌培養(yǎng)及菌絲抗原刺激液的制備
        2.2 小鼠真菌性角膜炎模型的建立
        2.3 小鼠角膜預處理實驗
        2.4 RAW264.7 細胞的培養(yǎng)和煙曲霉菌菌絲刺激實驗
        2.5 RAW264.7 細胞預處理實驗
        2.6 Real-time RT-PCR實驗方法
        2.7 Western blot實驗方法
        2.8 免疫熒光染色實驗方法
        2.9 比色法檢測小鼠角膜中性粒細胞髓過氧化物酶(MPO)
        2.10 CCK-8 細胞增殖檢測
        2.11 細胞劃痕試驗
    3 統(tǒng)計學處理
結(jié)果
    1 C57BL/6 小鼠真菌性角膜炎中Netrin-1 及其受體A2BAR的表達
    2 重組Netrin-1 對感染煙曲霉菌的C57BL/6 小鼠角膜炎癥的影響
    3 Netrin-1 抑制煙曲霉菌刺激的RAW264.7 細胞的炎癥反應
    4 Netrin-1 通過其受體A2BAR在C57BL/6小鼠和RAW 264.7細胞中發(fā)揮抑炎作用
    5 Netrin-1 促進HCECs增殖和遷移
討論
結(jié)論
參考文獻
綜述
    綜述參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
附錄
致謝



本文編號：3642753