背景:亨廷頓疾�。℉untington’s Disease,HD）是一種具有神經(jīng)退行性的常染色體顯性遺傳類疾病,其最明顯的臨床癥狀是患者出現(xiàn)不自主舞蹈樣動作,故該疾病也被稱為亨廷頓舞蹈癥。研究表明,HD具有年齡依賴性特征,即隨著年齡增加HD患者的病情會逐漸加重直至死亡。目前認為人類HD致病原因是其4號常染色體上的亨廷頓基因（Htt）外顯子1發(fā)生了CAG序列的異常突變加長,導(dǎo)致正常亨廷頓蛋白的錯誤折疊形成亨廷頓突變蛋白（mutant Huntingtin,mHtt）,細胞無法將mHtt完全清除,當mHtt累積聚集到一定程度后,會造成腦部紋狀體神經(jīng)元細胞變性和腦組織萎縮壞死。一般而言,CAG異常突變的長度越長,HD的發(fā)病年齡越早,疾病表型也會越嚴重�，F(xiàn)在常用的HD小鼠模型主要有以下三種:1)采取基因敲除方式靶向破壞致病基因的“敲除小鼠模型”;2)通過外源基因或啟動子的引入,條件過表達mHtt突變蛋白的N末端或者過表達全長突變蛋白的“轉(zhuǎn)基因小鼠模型”;3)僅在小鼠自身內(nèi)源性啟動子調(diào)控下改變內(nèi)源基因的“敲入小鼠模型”。目前,隨著CRISPR/Cas9等新興基因編輯技術(shù)的快速發(fā)展,研究人員在構(gòu)建... 

【文章來源】：西南大學重慶市211工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要英文縮略詞
第1章 文獻綜述
    1.1 三核苷酸重復(fù)疾病概述
        1.1.1 常見三核苷酸重復(fù)疾病介紹
        1.1.2 多聚谷氨酰胺疾病介紹
    1.2 亨廷頓疾病概述
        1.2.1 亨廷頓疾病介紹
        1.2.2 亨廷頓疾病的臨床研究
    1.3 亨廷頓疾病模型研究概述
        1.3.1 HD小鼠模型
        1.3.2 HD細胞模型
        1.3.3 HD其它模型
    1.4 基因編輯技術(shù)概述
        1.4.1 基因編輯技術(shù)介紹
        1.4.2 CRISPR/Cas9 介紹
        1.4.3 CRISPR/Cas9 在亨廷頓疾病中的實踐應(yīng)用
第2章 引言
第3章 材料與方法
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物與菌種
        3.1.2 實驗試劑及配制方法
        3.1.3 實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 Cas9/gRNA靶點設(shè)計及其體外酶切靶點活性檢測
        3.2.2 原位敲入小鼠模型F0 代的構(gòu)建
        3.2.3 原位敲入小鼠模型子代(F1、F2、F3 代)的傳代與鑒定
        3.2.4 原位敲入小鼠模型RNA轉(zhuǎn)錄情況檢測
        3.2.5 原位敲入小鼠模型蛋白質(zhì)表達情況檢測
第4章 實驗結(jié)果與分析
    4.1 Cas9/gRNA靶點序列設(shè)計及其靶點活性結(jié)果
        4.1.1 Cas9/gRNA第一次靶點序列設(shè)計及其靶點活性結(jié)果
        4.1.2 Cas9/gRNA第二次靶點序列設(shè)計及其靶點活性結(jié)果
    4.2 F0 代小鼠基因型鑒定結(jié)果
    4.3 子代(F1、F2、F3 代)小鼠基因型鑒定結(jié)果
        4.3.1 F1 代小鼠基因型鑒定
        4.3.2 F2 代小鼠基因型鑒定
        4.3.3 F3 代小鼠基因型鑒定
        4.3.4 子代小鼠基因型單克隆菌落PCR鑒定結(jié)果
    4.4 原位敲入模型小鼠RNA轉(zhuǎn)錄結(jié)果
        4.4.1 小鼠各組織RNA鑒定結(jié)果
        4.4.2 小鼠各組織RNA單克隆菌落PCR鑒定結(jié)果
    4.5 原位敲入模型小鼠組織蛋白表達結(jié)果
        4.5.1 正常小鼠蛋白預(yù)實驗結(jié)果
        4.5.2 模型小鼠蛋白實驗結(jié)果
    4.6 原位敲入模型小鼠其它分析結(jié)果
第5章 討論
    5.1 gRNA靶點序列對與150Q Donor質(zhì)粒的構(gòu)建分析
    5.2 150Q敲入小鼠模型分析
    5.3 關(guān)于150Q敲入小鼠基因型及其RNA轉(zhuǎn)錄相關(guān)情況說明
第6章 總結(jié)與展望
    6.1 HD原位敲入小鼠模型優(yōu)勢
    6.2 HD原位敲入小鼠模型不足之處
    6.3 本課題的后續(xù)實驗探討內(nèi)容
參考文獻
致謝
在校期間科研成果


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]亨廷頓舞蹈癥研究現(xiàn)狀[J]. 安平,魯伯塤.  中國細胞生物學學報. 2018(10)
[3]動物模型在神經(jīng)退行性疾病中的應(yīng)用[J]. 袁亦嬌,陳實.  中國細胞生物學學報. 2018(09)
[4]CRISPR/Cas系統(tǒng)在神經(jīng)系統(tǒng)研究中應(yīng)用的研究進展[J]. 何征暉,汪泱.  國際神經(jīng)病學神經(jīng)外科學雜志. 2018(04)
[5]Genome engineering using the CRISPR/Cas system[J]. Takuro Horii,Izuho Hatada.  World Journal of Medical Genetics. 2014(03)
[6]亨廷頓病經(jīng)典動物模型研究進展[J]. 蔣偉,華棟,雷霆,李齡.  中華神經(jīng)外科疾病研究雜志. 2010(05)
[7]Animal models of Huntington’s disease: implications in uncovering pathogenic mechanisms and developing therapies[J]. Lin-hui WANG~2 Zheng-hong QIN~(3,4) Departments of ~2Physiology and ~3Pharmacology,Soochow University School of Medicine,Suzhou 215123,China.  Acta Pharmacologica Sinica. 2006(10)



本文編號：3642671