目的基于Percoll不連續(xù)密度梯度法分離純化心肌細(xì)胞,建立一個快速穩(wěn)定提取新生小鼠心肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)方法。方法在無菌狀態(tài)下取C57BL/6乳鼠心室,用低濃度Ⅱ型膠原酶消化,通過調(diào)整溫度、消化方式、離心時間及轉(zhuǎn)速,采用Percoll密度梯度法分離純化心肌細(xì)胞。觀察不同時間心肌細(xì)胞形態(tài);用0.4%臺盼藍(lán)染色檢測細(xì)胞存活率及細(xì)胞數(shù)量;采用免疫熒光染色法檢測心肌肌鈣蛋白I（cTnI）表達(dá)情況,鑒定心肌細(xì)胞及其純度。結(jié)果 5次培養(yǎng)結(jié)果顯示,心肌細(xì)胞的平均存活率為（93.12±0.75）%,純度為（96.36±0.60）%,細(xì)胞生長狀態(tài)良好,可以貼壁自發(fā)搏動。結(jié)論采用本方法能獲得產(chǎn)量、存活率及純度很高的新生小鼠原代心肌細(xì)胞,耗時較短,是一種理想的分離純化原代心肌細(xì)胞的方法,可滿足后續(xù)各種實驗要求。 

【文章來源】：內(nèi)科. 2020,15(02)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗動物
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要設(shè)備和器材
    1.2 方法
        1.2.1 新生小鼠心肌組織的提取、分離、培養(yǎng)
        1.2.2 Percoll不連續(xù)密度梯度法純化新生小鼠心肌細(xì)胞
    1.3 細(xì)胞存活率及數(shù)量檢測
    1.4 心肌細(xì)胞類型和形態(tài)學(xué)觀察
    1.5 心肌細(xì)胞免疫熒光鑒定及純度分析
    1.6 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié) 果
    2.1 心肌細(xì)胞數(shù)量及存活率
    2.2 心肌細(xì)胞搏動類型、形態(tài)學(xué)觀察、搏動頻率
    2.3 新生小鼠原代心肌細(xì)胞鑒定及純度
3 討 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]改良的乳小鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)方法[J]. 吳丹,馮健,莫顯剛,劉應(yīng)才.  中國比較醫(yī)學(xué)雜志. 2016(04)
[2]小鼠乳鼠原代心肌細(xì)胞的改良培養(yǎng)[J]. 孟琳琳,黃鶯,馬依彤,劉芬,陳邦黨,陳小翠,蓋敏濤.  中國組織工程研究. 2015(37)
[3]新生小鼠心臟細(xì)胞體外共培養(yǎng)體系的建立及其在心肌細(xì)胞增殖研究中的應(yīng)用[J]. 胡金蓮,鄭怡文,谷曉蕾,陸國才.  北京醫(yī)學(xué). 2015(05)



本文編號：3640306