目的探究上皮細胞來源的外泌體在BCG（卡介苗）感染巨噬細胞產(chǎn)生炎性反應中的調(diào)控作用。方法本研究通過試劑盒提取經(jīng)BCG感染及未感染的人正常上皮細胞中的外泌體并對其進行鑒定;將用染料標記的外泌體與巨噬細胞共孵育觀察與巨噬細胞的作用過程;ELISA方法檢測外泌體刺激后巨噬細胞上清中炎性因子IL-6、IL-1β的含量;蛋白免疫印跡法檢測巨噬細胞中TLR2、TLR4、TLR6、MyD88、NF-κВ及TRAF6蛋白的表達。結(jié)果純化獲得的外泌體在電鏡下呈茶托狀,大小在30～100 nm;并表達外泌體的表面分子標志CD9、HSP70;DIR紅色染料標記的外泌體被巨噬細胞吞噬進入胞內(nèi);經(jīng)外泌體刺激能夠顯著增加巨噬細胞分泌的炎性因子IL-6、IL-1β（P<0.001）;且與BCG單獨處理組比較,無論BCG預處理上皮細胞或未處理的外泌體都能進一步升高BCG誘導的巨噬細胞分泌炎性因子水平（P<0.05）;同時TLR信號TLR2、TLR4、TLR6以及MyD88、NF-κВ、TRAF6蛋白在巨噬細胞受外泌體刺激后表達均顯著上調(diào)（P<0.05）。結(jié)論上皮細胞來源的外泌體通過激活TLR/MyD... 

【文章來源】：免疫學雜志. 2020,36(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

BEAS-2B細胞來源的外泌體的形態(tài)觀察及鑒定

巨噬細胞炎性因子的表達

為了研究外泌體通過何種途徑對細胞炎癥反應進行調(diào)控，我們檢測了TLR/MyD88依賴性信號通路中MyD88、TRAF6和NF-κВ的表達情況。Western blot檢測結(jié)果如圖4所示，與空白對照組比較，外泌體（-）處理組與外泌體（+）處理組的NF-κВ、MyD88、TRAF6的表達量均上調(diào)（P<0.001）；與BCG單獨處理組相比，經(jīng)外泌體（-）+BCG組與外泌體（+）+BCG組刺激過的巨噬細胞MyD88、TRAF6、NF-κВ的表達量顯著升高（P<0.05）。表明外泌體可增強巨噬細胞TLR/MyD88依賴性信號通路中MyD88、TRAF6、NF-κВ蛋白的表達。圖4 外泌體刺激巨噬細胞后MyD88、NF-κВ、TRAF6的表達

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3619345