發(fā)布時(shí)間：2022-02-09 12:43

　　中東呼吸綜合征冠狀病毒（Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV）是目前已發(fā)現(xiàn)的六種人冠狀病毒中自嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥（Sever acute respiratory syndrome,SARS）以來的的第二種高致病性人冠狀病毒,截至2018年3月,世界衛(wèi)生組織（World Health Organization,WHO）數(shù)據(jù)顯示超過27個國家報(bào)告了 MERS病例,其中有2189例實(shí)驗(yàn)室確診病例,782例死亡病例,高達(dá)35%的病死率。迄今尚無有效的預(yù)防性疫苗與抗病毒藥物的應(yīng)用是報(bào)道。借鑒被動免疫治療及人源中和單抗在新發(fā)傳染病應(yīng)急治療中的應(yīng)用報(bào)道,多項(xiàng)研究提示應(yīng)用MERS-CoV特異性人源中和抗體已被認(rèn)為是有效的治療方案選項(xiàng)。目前國內(nèi)外在MERS-CoV特異性人源中和抗體研究上雖有一定進(jìn)展,但大多數(shù)人源抗體中和活性不強(qiáng),仍需研發(fā)獲得更多更強(qiáng)的MERS-CoV特異性人源中和抗體,并對其中和表位與分子機(jī)制進(jìn)行更全面深入的分析,為疫苗研發(fā)及中和抗體的臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)。在這項(xiàng)研究中,我們從2015年中國首例輸入性MERS-CoV... 

【文章來源】：中國疾病預(yù)防控制中心北京市

【文章頁數(shù)】：134 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

預(yù)防組和治療組轉(zhuǎn)基因小鼠免疫流程圖

圖４?ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染患者外周血Ｂ細(xì)胞的篩選結(jié)果。??步驟１．從收集的ＭＥＲＳ－ＣｏＶ患者的ＰＢＭＣ中分離Ｂ細(xì)胞，然后在含有３Ｔ３細(xì)胞，ｈＩＬ－２，??ＣｐＧ２００６和ｈＩＬ－２１的情況下在９６孔板中培養(yǎng)１０天。??步驟２．通過ＥＬＩＳＡ方法驗(yàn)證Ｂ細(xì)胞培養(yǎng)上清液與ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ的結(jié)合活性。??

擴(kuò)増片段為４００ｂｐ。各個擴(kuò)增產(chǎn)物及表達(dá)載體：重鏈載體ＩｇＧ－ＡｂＶｅｃ??（ＰＢＲ３２２?ｂａｓｅｄ）、輕鏈載體?ＩｇＬＡｂＶｅｃ?（ＰＢＲ３２２?ｂａｓｅｄ）、ＩｇＫ－ＡｂＶｅｃ?（ＰＢＲ３２２??ｂａｓｅｄ）分別用相應(yīng)的內(nèi)切酶進(jìn)行酶切反應(yīng)，具體結(jié)果見圖６，可變區(qū)基因擴(kuò)增及??酶切良好，相應(yīng)表達(dá)載體酶切良好。并將相應(yīng)產(chǎn)物片段克隆到表達(dá)載體中，所得??質(zhì)粒送測序分析。??Ｍ５０?Ｈ８?Ｈ２７?Ｈ２８?Ｈ３３?Ｈ３８?Ｈ３９?Ｈ４０?Ｈ４１?Ｈ４２?Ｈ４３?Ｈ４５?Ｍ５Ｋ?Ｈ－Ｖｃｃ?Ｌ－Ｖｅｃ?Ｋ－Ｖｃｃ??Ｍ５０?Ｌ８?Ｌ２７?Ｌ２８?Ｌ３３Ｌ３８Ｌ３９?Ｋ４０?Ｋ４Ｕ．４２?�。矗�?Ｕ５??ｍ……編??閣５１１孔抗體基因重鏈／輕鏈ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物及克隆載體雙酶切純化后瓊脂糖凝膠電泳圖。??Ｍ５０：?５０?ｂｐ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ。Ｍ５ｋ：?５ｋ?ｋｂ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ：

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MERS-CoV動物模型研究進(jìn)展[J]. 藍(lán)佳明,鄧瑤,譚文杰.  病毒學(xué)報(bào). 2016(03)
[2]Two-tube multiplex real-time reverse transcription PCR to detect six human coronaviruses[J]. Peihua Niu,Jun Shen,Na Zhu,Roujian Lu,Wenjie Tan.  Virologica Sinica. 2016(01)



本文編號：3617028