T淋巴細(xì)胞是機(jī)體抵抗外界病原體的最重要的免疫細(xì)胞,其在胸腺發(fā)育和選擇的過(guò)程中獲得抗原特異性并建立對(duì)自身抗原的耐受,因此發(fā)育過(guò)程一直是國(guó)際免疫學(xué)界關(guān)注的熱點(diǎn)研究領(lǐng)域之一。T細(xì)胞在胸腺中的發(fā)育過(guò)程主要經(jīng)歷以下階段:骨髓來(lái)源的前體細(xì)胞經(jīng)過(guò)胸腺皮髓交界處的血管進(jìn)入到胸腺的皮質(zhì)。這一時(shí)期細(xì)胞表面不表達(dá)CD4和CD8分子,稱為雙陰性CD4-CD8-（DN）細(xì)胞。根據(jù)細(xì)胞表面CD25和CD44分子的表達(dá)情況,DN細(xì)胞又可細(xì)分為DN1（CD25-CD44-）,DN2（CD25-CD44+）,DN3（CD25+CD44+）,DN（CD25+CD44-）4 四個(gè)階段。之后細(xì)胞表面開(kāi)始同時(shí)表達(dá)CD4和CD8分子,故稱為雙陽(yáng)性CD4+CD8+（DP）細(xì)胞。DP在胸腺皮質(zhì)完成陽(yáng)性選擇后遷移到胸腺的髓質(zhì)部位,經(jīng)陰性選擇去除與自身抗原高清合力的克隆,發(fā)育為成熟的CD4+或CD8+單陽(yáng)性（SP）T細(xì)胞,之后遷移到外周發(fā)揮免疫功能。在此過(guò)程中,只有少數(shù)表達(dá)與自身抗原肽MHC復(fù)合物有適度親和力的T細(xì)胞受體（T-cell Receptor,TCR）的胸腺細(xì)胞能通過(guò)細(xì)胞選擇過(guò)程存活下來(lái),發(fā)育為成熟的T細(xì)胞。因此對(duì)于胸腺細(xì)胞的... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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圖３．１胸腺Ｔ細(xì)胞的磷酸化質(zhì)譜分析和Ｐｐ；？２ｃｆｌ條件性敲除小鼠的構(gòu)建??Ｆｉｇｕｒｅ３．１?Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ?ｍａｓｓ?ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ?ｏｆ?

ＰＰ２ＡｃＫ０小鼠的生長(zhǎng)和繁殖均無(wú)明顯的缺陷，接著我們針對(duì)Ｔ細(xì)胞的發(fā)育進(jìn)??行了表型分析。我們發(fā)現(xiàn)ｃＫＯ小鼠與同窩的野生型對(duì)照小鼠相比，胸腺明顯減小??（圖３．３．１?Ａ，?ｌｅｆｔ），且胸腺細(xì)胞數(shù)目大幅度減少（圖３．３．１?Ａ，?ｒｉｇｈｔ）。ＨＥ染色顯示??ＰＰ２Ａ敲除之后胸腺的髄質(zhì)減�。▓D３．３．１?Ｂ）。流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果顯示，與同窩的??野生型小鼠相比，ｃＫＯ小鼠胸腺中ＤＮ細(xì)胞百分比增加，ＤＰ細(xì)胞百分比減少。ＤＰ、??ＣＤ＾Ｔ、ＣＤ８＋Ｔ細(xì)胞數(shù)目明顯減少（圖３．３．１?Ｃ）。我們對(duì)ＤＮ細(xì)胞進(jìn)一步的分析，??發(fā)現(xiàn)ｃＫＯ小鼠ＤＮ１－ＤＮ４四個(gè)階段細(xì)胞的百分比和細(xì)胞數(shù)沒(méi)有變化（圖３．３．１?Ｄ）。??ＤＮ期之后胸腺細(xì)胞表達(dá)ＣＤ８分子，發(fā)育為一個(gè)介于ＤＮ和ＤＰ之間的階段ＩＳＰ??（ｉｍｍａｔｕｒｅ?ｓｉｎｇｌｅ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ）?ＣＤ８＋?Ｔ細(xì)胞。流式分析結(jié)果也顯示：ＰＰ２Ａ缺失后ＩＳＰ??階段發(fā)育不受影響（圖３．３．１?Ｅ）。這些結(jié)果提示，ＰＰ２Ａ敲除之后，胸腺Ｔ細(xì)胞的??發(fā)育缺陷始于ＤＰ階段。沖丁細(xì)胞是執(zhí)行固有免疫功能的Ｔ細(xì)胞，其ＴＣＲ由Ｙ和３??鏈組成［６５］。此類Ｔ細(xì)胞主要分布于腸道呼吸道以及泌尿生殖道等黏膜和皮下組織，??在外周血中只占ＣＤ３＋Ｔ細(xì)胞的０．５％－１％。？？２八敲除后Ｙ５Ｔ細(xì)胞不受影響（圖３．３．１??Ｆ）。ＮＫＴ細(xì)胞是一群表達(dá)ＮＫ細(xì)胞ｍａｒｋｅｒ的胸腺Ｔ

?實(shí)驗(yàn)結(jié)果??圖３．１．２?Ｐｐｐ２ｃａ條件性敲除小鼠胸腺Ｔ細(xì)胞發(fā)育受阻??Ｆｉｇｕｒｅ?３．３．１?Ｂｌｏｃｋｅｄ?Ｔ?ｃｅｌｌ?ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ?ｉｎ?Ｐｐｐ２ｃａ?ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ?ｋｎｏｃｋｏｕｔ?ｍｉｃｅ．??（Ｅ）?Ｓｕｒｆａｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ＣＤ２４?ａｎｄ?ＴＣＲｂ?ｔｏ?ｓｈｏｗ?ｔｈｅ?ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ?ａｎｄ?ｃｅｌｌ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ＩＳＰ??（Ｉｍｍａｔｕｒｅ?Ｓｉｎｇｌｅ?Ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ＣＤ８＋）．?（Ｆ）?ｙｐ?Ｔ?ｉｓ?ｎｏｔ?ａｆｆｅｃｔ?ｉｎ?ＰＰ２Ａ?ｃＫＯ?ｍｉｃｅ?ｔｈｙｍｕｓ．?（Ｇ）??Ｔｈｅ?ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ?ａｎｄ?ｃｅｌｌ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ｎＴｒｅｇ?ｆｒｏｍ?ｉｎｄｉｃａｔｅｄ?ｍｉｃｅ．?（Ｈ）?Ｔｈｅ?ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ?ｏｆ??ＮＫＴ?ｃｅｌｌｓ?ｉｎ?ｔｈｙｍｕｓ．?＊Ｐ?＜?０．０５；?＊＊Ｐ?＜０．０１；?＊＊＊Ｐ?＜?０．００１．??３．３．２胸腺Ｔ細(xì)胞的體外發(fā)育誘導(dǎo)??為了進(jìn)一步確認(rèn)Ｔ細(xì)胞發(fā)育受阻是由于Ｔ細(xì)胞本身缺失ＰＰ２Ａｃ所引起的，我??們利用ＯＰ９－ＤＬ１共培養(yǎng)體外誘導(dǎo)胸腺Ｔ細(xì)胞發(fā)育。我們分選了胸腺ＤＮ３細(xì)胞，??與ＯＰ９－ＤＬ１共培養(yǎng)并補(bǔ)充所需的細(xì)胞因子ＩＬ－７和Ｆｌｔ－３Ｌ，５天之后分析ＤＮ３細(xì)胞??的發(fā)育情況［６８，６９］。結(jié)杲顯示：與ＷＴ相比，ｃＫＯ小鼠ＤＮ３時(shí)期的細(xì)胞向ＤＮ４??的發(fā)育沒(méi)有受到影響（圖３．３．２?Ａ）；但是ＤＮ的百分比增加，ＤＰ百分比減少（圖??３．３＿２?Ｂ）。提示我們ＰＰ２Ａ缺失之后


本文編號(hào)：3616203