肺泡巨噬細(xì)胞是結(jié)核分枝桿菌侵入宿主后的第一生存環(huán)境。進(jìn)入宿主巨噬細(xì)胞后,結(jié)核分枝桿菌能通過(guò)各種機(jī)制逃避宿主的免疫監(jiān)視和清除作用。分泌蛋白作為重要毒力因子能夠與宿主的某些組分相互作用,幫助病原菌在宿主細(xì)胞內(nèi)居留、繁殖和擴(kuò)散。但是,目前已知的在結(jié)核分枝桿菌侵染巨噬細(xì)胞過(guò)程中發(fā)揮作用的分泌蛋白數(shù)量非常有限,相關(guān)調(diào)控機(jī)制也有待闡明。本研究以卡介苗（BCG）菌株-牛巨噬細(xì)胞（BoMac）相互作用為模型,篩選和初步發(fā)現(xiàn)了3個(gè)新分泌蛋白（Rv0671,Rv0817,Rv1813）,并對(duì)它們的調(diào)控作用進(jìn)行了探討,主要取得了以下結(jié)果:（1）在實(shí)驗(yàn)室前期大規(guī)模篩選的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步構(gòu)建了17個(gè)超表達(dá)結(jié)核分枝桿菌潛在分泌蛋白的BCG重組菌株,并逐一完成了牛巨噬細(xì)胞（BoMac）的侵染實(shí)驗(yàn);（2）利用RNA-seq技術(shù)對(duì)所有這些細(xì)菌侵染的BoMac中基因轉(zhuǎn)錄變化進(jìn)行檢測(cè),并系統(tǒng)比較分析了它們對(duì)細(xì)胞凋亡信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、IL-17信號(hào)通路、氧化磷酸化過(guò)程、細(xì)胞因子與受體互作等的調(diào)控效應(yīng),篩選出了Rv0671,Rv0817,Rv1813,Rv3310和Rv3841等5個(gè)分泌蛋白明顯影響宿主巨噬細(xì)胞免疫功能;... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

結(jié)核分枝桿菌中SecA1、SecA2和Tat蛋白分泌系統(tǒng)示意圖(Majlessietal2015)

也被稱(chēng)為 T7S 系統(tǒng) (Abdallah et al 2007; Bitter et al 2009) 。基因組研究發(fā)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌有 5 種 ESX / T7S 系統(tǒng)，涉及細(xì)菌的生理過(guò)程和宿主與病原體的相互作用。圖1.3列出了結(jié)核分枝桿菌中5種ESX系統(tǒng)的遺傳信息 (Majlessi et al 2015) 。ESX-1 系統(tǒng)對(duì)結(jié)核分枝桿菌毒力的影響已被廣泛報(bào)道，但 ESX-1 系統(tǒng)相關(guān)的細(xì)菌干擾宿主細(xì)胞機(jī)制尚不明確。結(jié)核分枝桿菌 ESX-1 有關(guān)致病機(jī)制涉及一些存在相互影

五個(gè)結(jié)核分枝桿菌分泌蛋白對(duì)宿主巨噬細(xì)胞免疫功能的調(diào)控影響研究表達(dá)分泌蛋白的 BCG 重組菌株的構(gòu)建驗(yàn)旨在研究表 3.1 中候選分泌蛋白基因在 BCG 超表達(dá)重組菌巨噬細(xì)胞（BoMac）免疫功能的影響。為此，首先要構(gòu)建這組菌株。通過(guò)基因克隆和測(cè)序驗(yàn)證，我們得到了這些基因的并且將超表達(dá)載體電轉(zhuǎn)入 BCG 野生型菌株感受態(tài)中，得到對(duì)菌株。隨后抽提重組菌株的穿梭質(zhì)粒，再次轉(zhuǎn)化入 DH5α感質(zhì)粒作為模版進(jìn)行 PCR 驗(yàn)證后 ( 如圖 3.1 ) ，最終得到轉(zhuǎn)61 超表達(dá)載體的 BCG 重組菌株和 pMV261 超表達(dá)原始質(zhì)粒實(shí)驗(yàn)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Tyrosine phosphorylation and bacterial virulence[J]. Sarah E Whitmore,Richard J Lamont.  International Journal of Oral Science. 2012(01)



本文編號(hào)：3610469