肺泡巨噬細胞是結核分枝桿菌侵入宿主后的第一生存環(huán)境。進入宿主巨噬細胞后,結核分枝桿菌能通過各種機制逃避宿主的免疫監(jiān)視和清除作用。分泌蛋白作為重要毒力因子能夠與宿主的某些組分相互作用,幫助病原菌在宿主細胞內居留、繁殖和擴散。但是,目前已知的在結核分枝桿菌侵染巨噬細胞過程中發(fā)揮作用的分泌蛋白數(shù)量非常有限,相關調控機制也有待闡明。本研究以卡介苗（BCG）菌株-牛巨噬細胞（BoMac）相互作用為模型,篩選和初步發(fā)現(xiàn)了3個新分泌蛋白（Rv0671,Rv0817,Rv1813）,并對它們的調控作用進行了探討,主要取得了以下結果:（1）在實驗室前期大規(guī)模篩選的基礎上,進一步構建了17個超表達結核分枝桿菌潛在分泌蛋白的BCG重組菌株,并逐一完成了牛巨噬細胞（BoMac）的侵染實驗;（2）利用RNA-seq技術對所有這些細菌侵染的BoMac中基因轉錄變化進行檢測,并系統(tǒng)比較分析了它們對細胞凋亡信號通路、TNF信號通路、IL-17信號通路、氧化磷酸化過程、細胞因子與受體互作等的調控效應,篩選出了Rv0671,Rv0817,Rv1813,Rv3310和Rv3841等5個分泌蛋白明顯影響宿主巨噬細胞免疫功能;... 

【文章來源】：華中農業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

結核分枝桿菌中SecA1、SecA2和Tat蛋白分泌系統(tǒng)示意圖(Majlessietal2015)

也被稱為 T7S 系統(tǒng) (Abdallah et al 2007; Bitter et al 2009) �；蚪M研究發(fā)現(xiàn)結核分枝桿菌有 5 種 ESX / T7S 系統(tǒng)，涉及細菌的生理過程和宿主與病原體的相互作用。圖1.3列出了結核分枝桿菌中5種ESX系統(tǒng)的遺傳信息 (Majlessi et al 2015) 。ESX-1 系統(tǒng)對結核分枝桿菌毒力的影響已被廣泛報道，但 ESX-1 系統(tǒng)相關的細菌干擾宿主細胞機制尚不明確。結核分枝桿菌 ESX-1 有關致病機制涉及一些存在相互影

五個結核分枝桿菌分泌蛋白對宿主巨噬細胞免疫功能的調控影響研究表達分泌蛋白的 BCG 重組菌株的構建驗旨在研究表 3.1 中候選分泌蛋白基因在 BCG 超表達重組菌巨噬細胞（BoMac）免疫功能的影響。為此，首先要構建這組菌株。通過基因克隆和測序驗證，我們得到了這些基因的并且將超表達載體電轉入 BCG 野生型菌株感受態(tài)中，得到對菌株。隨后抽提重組菌株的穿梭質粒，再次轉化入 DH5α感質粒作為模版進行 PCR 驗證后 ( 如圖 3.1 ) ，最終得到轉61 超表達載體的 BCG 重組菌株和 pMV261 超表達原始質粒實驗。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Tyrosine phosphorylation and bacterial virulence[J]. Sarah E Whitmore,Richard J Lamont.  International Journal of Oral Science. 2012(01)



本文編號：3610469