目的:考察殘黃片對α-萘異硫氰酸酯（ANIT）誘導(dǎo)黃疸模型大鼠肝臟法尼醇X受體（FXR）,尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1A1（UGT1A1）和多藥耐藥相關(guān)蛋白2（MRP2）mRNA和蛋白表達(dá)的影響,探討其治療殘留黃疸的作用機(jī)制。方法:大鼠分為正常組、模型組、殘黃片（CHP）組和熊去氧膽酸片（UDCA）組,ANIT灌胃復(fù)制黃疸模型,相應(yīng)藥物干預(yù)后進(jìn)行血清總膽紅素（TBIL）,總膽汁酸（TBA）,丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）,天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）和堿性磷酸酶（ALP）的含量檢測和肝組織病理學(xué)檢查,以評價(jià)殘黃片的治療作用。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）和蛋白質(zhì)免疫印跡試驗(yàn)（Western blot）檢測各組大鼠肝組織FXR,UGT1A1,MRP2 mRNA和蛋白的相對表達(dá)量。結(jié)果:CHP能顯著降低由ANIT引起的大鼠血清TBIL,TBA,ALT,AST,ALP的升高,抑制肝臟病理學(xué)改變,退黃作用優(yōu)于UDCA。與正常組比較,ANIT造模后顯著抑制大鼠肝組織FXR,UGT1A1,MRP2的mRNA水平（P<0.01）。與模型組比較,CHP和UDCA干預(yù)后均顯著提升了各蛋白... 

【文章來源】：中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志. 2020,26(17)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

各組大鼠肝組織的病理觀察（HE，×200)

肝臟FXR是膽汁成分的天然受體，定位于肝細(xì)胞核受體膜，對膽汁的形成和轉(zhuǎn)運(yùn)具有調(diào)控作用。有研究顯示，F(xiàn)XR激動劑可誘導(dǎo)MRP2蛋白的表達(dá)，促進(jìn)淤積的膽紅素、膽汁酸鹽以及有毒物質(zhì)的外排[9-10]。UGT1A1主要存在于肝細(xì)胞微粒體上，可選擇性催化80%的脂溶性未結(jié)合膽紅素與葡萄糖醛酸結(jié)合，產(chǎn)生水溶性膽紅素葡萄糖醛酸結(jié)合物，進(jìn)而被肝細(xì)胞基底側(cè)MRP2轉(zhuǎn)運(yùn)入毛細(xì)膽管，排出肝臟[11-12]。本課題組前期分子對接研究結(jié)果提示，CHP中的小檗浸堿、氫化小檗堿、穆坪馬兜鈴酰胺、槲皮素、去甲氧基姜黃素、榿木酮、黃柏酮、姜黃素、柚皮素和Corchoroside A共10個成分與FXR，一氧化氮合酶，三磷酸鳥苷（GTP）環(huán)化水解酶1，細(xì)胞色素P450 2E1，單胺氧化酶A等7個以上靶點(diǎn)作用，通過促進(jìn)膽汁排泄、調(diào)節(jié)膽汁酸生成與重吸收、調(diào)控膽紅素代謝、調(diào)節(jié)免疫與細(xì)胞凋亡等多個途徑發(fā)揮作用[5]。相關(guān)研究顯示，黃連所含生物堿對大鼠肝細(xì)胞UGT1A1蛋白有激活作用[13]，并激活FXR和提升膽汁酸鹽輸出泵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（BSEP）表達(dá)而促進(jìn)肝臟膽汁的排出[14]。本研究結(jié)果顯示，CHP能顯著提高黃疸模型大鼠肝臟UGT1A1的mRNA和蛋白表達(dá)，恢復(fù)肝細(xì)胞對游離膽紅素的代謝，有助于排出肝臟。與此同時，CHP激活大鼠肝組織FXR mRNA的表達(dá)，并顯著提升其下游的MRP2 mRNA和蛋白表達(dá)，促進(jìn)了膽紅素和膽汁酸鹽排出肝臟，降低膽汁淤積引起的肝損傷。本研究結(jié)果也驗(yàn)證了分子對接模擬的CHP調(diào)節(jié)肝內(nèi)膽紅素及膽汁代謝轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白的作用機(jī)制，填補(bǔ)了該制劑退黃機(jī)制研究的空白。膽汁的形成和轉(zhuǎn)運(yùn)不僅涉及膽紅素，還與多種初級膽汁酸和次級膽汁酸的代謝轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)。成人平均膽汁酸總量3～5 g，每天可循環(huán)5～8次，由肝臟排出的膽汁酸95%在腸道被重吸收，經(jīng)門靜脈回到肝臟，形成肝腸循環(huán)[15-16]。CHP成分復(fù)雜多樣，其退黃機(jī)制可能不僅限于FXR及下游靶點(diǎn)，還可能與肝臟膽汁酸代謝酶、肝血竇膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白以及腸道膽汁成分轉(zhuǎn)運(yùn)體有關(guān)。從膽汁的肝腸循環(huán)角度，借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法建立“疾病-基因-靶點(diǎn)-成分”相互作用網(wǎng)絡(luò)，預(yù)測CHP可能的作用靶點(diǎn)和機(jī)制，結(jié)合成分敲入敲出和血清LC-MS分析方法進(jìn)行驗(yàn)證，將有望全面闡釋CHP退黃作用機(jī)制。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]基于超微粉碎工藝的殘黃片質(zhì)量穩(wěn)定性提升[J]. 吉日木巴圖,張?jiān)婟?范娜,宋楊,王嘯洋,韓晉.  中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志. 2018(12)
[3]6種黃連生物堿對鼠肝微粒體UGTs及UGT1A1活性影響的體內(nèi)外研究[J]. 趙園園,苗培培,苗青,郭嫦娥,陳紅影,陳寧,張玉杰,馬雙成.  中國中藥雜志. 2016(02)
[4]ANIT誘導(dǎo)大鼠亞急性肝內(nèi)膽汁淤積的生化和病理變化[J]. 歐巧群,錢新華,黃笑群,王輝陽.  胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志. 2015(04)
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[7]Physiology of bile secretion[J]. Alejandro Esteller.  World Journal of Gastroenterology. 2008(37)

博士論文
[1]黃連生物堿調(diào)節(jié)高脂C57BL/6J小鼠膽汁酸信號通路和腸道微生物改善血脂異常研究[D]. 賀凱.西南大學(xué) 2017



本文編號：3606265