目的探討27nt-miRNA對(duì)西羅莫司誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞自噬的調(diào)控作用及分子機(jī)制。方法將大鼠主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞分為正常組、西羅莫司組、27nt-miRNA組、anti-27nt-miRNA組和陰性對(duì)照組。正常組給予正常培養(yǎng);西羅莫司組用100 nmol·L^-1西羅莫司作用6 h建立自噬模型;27nt-miRNA組、anti-27nt-miRNA組及陰性對(duì)照組先轉(zhuǎn)染相應(yīng)慢病毒載體,待轉(zhuǎn)染成功后用100 nmol·L^-1西羅莫司作用6 h建立自噬模型。用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）法驗(yàn)證27nt-miRNA慢病毒穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建情況,用透射電鏡觀察5組細(xì)胞內(nèi)部自噬小體數(shù)量,用四甲基偶氮唑鹽法檢測(cè)5組細(xì)胞活性,用Western blot法與qRT-PCR法檢測(cè)LC3-Ⅰ/Ⅱ、Beclin-1、PI3K、Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR的蛋白和mRNA表達(dá)水平。結(jié)果慢病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞成功后27nt-miRNA的表達(dá)受到影響;與陰性對(duì)照組相比,細(xì)胞內(nèi)自噬小體及自噬溶酶體顯著增多,27nt-miRNA組細(xì)胞的活性顯著增強(qiáng)[（0.90... 

【文章來源】：中國臨床藥理學(xué)雜志. 2020,36(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

透射電鏡觀察5組細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)與自噬小體數(shù)量結(jié)果(×2.5×104)

Akt、mTOR在各組間細(xì)胞中表達(dá)無顯著性差異(P>0.05)。與正常組比較,西羅莫司組與陰性對(duì)照組的PI3K、p-Akt、p-mTOR表達(dá)量均顯著降低(均P<0.05),且后兩組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。與陰性對(duì)照組比較,27nt-miRNA組的PI3K、p-Akt、p-mTOR表達(dá)量均顯著降低(均P<0.05),anti-27nt-miRNA組的PI3K、p-Akt、p-mTOR表達(dá)量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05),提示在西羅莫司誘導(dǎo)細(xì)胞自噬后,上調(diào)27nt-miRNA表達(dá)量可通過抑制PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)一步上調(diào)自噬水平。表1 比較5組細(xì)胞PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)量的結(jié)果 (n=3, x ˉ ±s) Table 1 Comparison of the key proteins relative expression levels of PI3K/Akt/mTOR signaling pathway among five groups (n=3, x ˉ ±s) Item Normal Rapamycin 27nt-miRNA Anti-27nt-miRNA Negative control PI3K 0.37± 0.02 0.27± 0.02* 0.14± 0.04*# 0.26± 0.03* 0.25± 0.04* Akt 0.85± 0.05 0.84± 0.04 0.89± 0.03 0.90± 0.02 0.88± 0.05 p-Akt 0.61± 0.07 0.51± 0.02* 0.41± 0.02*# 0.50± 0.01* 0.52± 0.02* mTOR 0.38± 0.01 0.37± 0.04 0.41± 0.01 0.39± 0.05 0.39± 0.08 p-mTOR 0.16± 0.02 0.13± 0.01* 0.07± 0.00*# 0.14± 0.01* 0.14± 0.00* Compared with normal group,*P<0.05; Compared with negative control group, #P<0.05

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]微小RNA在心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)中的研究現(xiàn)狀[J]. 朱煙朦,謝冰鑫,孫麗華.  中國臨床藥理學(xué)雜志. 2019(19)
[2]脂肪酸合成酶抑制劑TVB-2640對(duì)膀胱癌細(xì)胞的影響研究[J]. 顏新建,李高峰,吳添雨,唐梅.  中國臨床藥理學(xué)雜志. 2019(18)
[3]27nt-miRNA對(duì)血管平滑肌細(xì)胞SM22α表達(dá)的調(diào)節(jié)及其對(duì)細(xì)胞活力、遷移和表型改變的影響[J]. 沈鳳,楊鵬,陶曉靜,李丹,顏淵鴛,羅雪蘭,秦祖杰,覃裕旺,歐和生.  中國病理生理雜志. 2019(02)
[4]姜黃素對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)損傷后神經(jīng)再生過程中細(xì)胞自噬的影響[J]. 李凱,馬鍇.  中國臨床藥理學(xué)雜志. 2019(04)
[5]粉防己堿對(duì)小鼠肺成纖維細(xì)胞的凋亡及Caspase-3蛋白的影響[J]. 梁曉飛,王銘,肖永紅.  中國臨床藥理學(xué)雜志. 2016(06)



本文編號(hào)：3601970