免疫系統(tǒng)是維持機體內(nèi)部穩(wěn)定健康環(huán)境的重要“守衛(wèi)”,但在疾病發(fā)生、發(fā)展過程中,由于病灶部位的微環(huán)境變化和免疫系統(tǒng)的不穩(wěn)定會導(dǎo)致免疫系統(tǒng)無法正常發(fā)揮其免疫監(jiān)視、免疫清除和免疫耐受的功能,從而導(dǎo)致機體的保護機制失調(diào),造成如腫瘤的免疫逃逸、自身免疫病等情況的發(fā)生。如何使機體免疫細胞恢復(fù)功能是此類疾病治療過程中最重要的環(huán)節(jié)之一。隨著免疫治療的針對性藥物研究和發(fā)展,越來越多的抗體類藥物以及核酸類藥物用于靶向免疫細胞來恢復(fù)免疫細胞的正常功能。但由于藥物遞送效率問題使其在臨床應(yīng)用上的治療效果受到顯著影響。如何將這些藥物更準(zhǔn)確、更高效的運送到病灶區(qū)域或免疫細胞,提高藥效、降低副作用,成為藥物研究者關(guān)注的問題。在本課題中,我們使用靶向不同細胞的免疫治療方案用以針對不同疾病,并使用兩種不同的納米遞送系統(tǒng),分別用于遞送抗體藥物和siRNA藥物。通過靈活使用藥物功能、更高效地增強或減弱免疫細胞功能,達到抑制腫瘤生長或控制自身免疫病的目的。本課題主要分為以下兩個部分:（1）我們將靶向NK細胞表面抑制性受體KLRG1的抗體和靶向腫瘤細胞表面PDL1的抗體同步結(jié)合到抗體遞送的納米適配子表面,構(gòu)建得到一種能調(diào)節(jié)NK細胞... 

【文章來源】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 免疫系統(tǒng)紊亂與治療手段
    1.2 腫瘤免疫治療的現(xiàn)狀
    1.3 NK細胞與腫瘤免疫
    1.4 靶向NK細胞的腫瘤免疫治療策略
    1.5 靶向NK細胞的抗體與抗腫瘤免疫
    1.6 抗體藥物遞送的困境和解決方案
    1.7 自身免疫病與免疫治療
    1.8 靶向免疫細胞的自身免疫性疾病治療
    1.9 納米遞送載體特性與免疫細胞靶向
    1.10 本課題選題目的及主要研究內(nèi)容
    參考文獻
第二章 通過納米適配子系統(tǒng)攜載靶向NK細胞和腫瘤細胞的免疫檢查點抗體激活NK細胞腫瘤免疫功能的研究
    2.1 引言
    2.2 實驗材料及方法
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 細胞培養(yǎng)和動物模型
        2.2.3 NK細胞的體外分離與培養(yǎng)
        2.2.4 納米適配子納米載體的制備和表征
        2.2.5 凝膠電泳(SDS)檢測αFc抗體氧化后與PS的結(jié)合情況
        2.2.6 DLS檢測納米適配子在蔗糖溶液及FPS中的粒徑穩(wěn)定性
        2.2.7 MTT檢測納米適配子及免疫檢查點抗體的細胞毒性
        2.2.8 流式細胞術(shù)(FACS)檢測納米適配子靶向腫瘤細胞及NK細胞的能力
        2.2.9 激光共聚焦顯微鏡觀測納米適配子對腫瘤細胞和NK細胞靶向作用
        2.2.10 高內(nèi)涵成像系統(tǒng)觀測及檢測納米適配子促進NK細胞對腫瘤細胞的生長抑制
        2.2.11 酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測納米適配子對NK細胞激活釋放細胞因子的影響
        2.2.12 黑色素瘤(B16-F10)的原位荷瘤小鼠模型建立及治療
        2.2.13 三陰性乳腺癌(4T1)的原位荷瘤小鼠模型建立及治療
        2.2.14 黑色素瘤(B16-F10)的肺部轉(zhuǎn)移小鼠模型建立及治療
        2.2.15 三陰性乳腺癌(4T1)的肺部轉(zhuǎn)移小鼠模型建立及治療
        2.2.16 免疫組化法觀測肺轉(zhuǎn)移模型治療后小鼠肺部轉(zhuǎn)移情況
        2.2.17 流式細胞術(shù)(FACS)檢測治療后腫瘤免疫微環(huán)境變化及細胞因子變化
        2.2.18 小鼠NK細胞清除模型及該模型下的腫瘤生長及治療
        2.2.19 小鼠T細胞清除模型及該模型下的腫瘤生長及治療
        2.2.20 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 納米適配子的制備及表征
        2.3.2 細胞水平檢測ACNA與腫瘤細胞及NK細胞的靶向結(jié)合
        2.3.3 細胞水平觀測ACNA對腫瘤細胞與NK細胞相互作用的促進
        2.3.4 細胞水平檢測ACNA對NK細胞的激活作用
        2.3.5 細胞水平檢測ACNA對NK細胞殺傷腫瘤細胞效果的促進
        2.3.6 體內(nèi)治療檢測ACNA對皮下腫瘤模型的治療效果
        2.3.7 體內(nèi)治療檢測ACNA對肺轉(zhuǎn)移模型的抑制效果
        2.3.8 體內(nèi)細胞清除實驗檢測ACNA的靶向功能細胞
    2.4 本章小結(jié)
    參考文獻
第三章 陽離子脂質(zhì)納米顆粒輸送靶向Bruton絡(luò)氨酸激酶的小干擾RNA用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療的研究
    3.1 引言
    3.2 實驗材料及方法
        3.2.1 主要材料
        3.2.2 細胞系及細胞培養(yǎng)
        3.2.3 實驗動物與膠原性關(guān)節(jié)炎小鼠模型
        3.2.4 CLAN_(siRNA)的合成和表征
        3.2.5 體外檢測CLAN_(siRNA)的細胞攝取
        3.2.6 體外檢測CLAN_(siBTK)下調(diào)細胞BTK表達水平
        3.2.7 體內(nèi)檢測CLAN的免疫細胞攝取
        3.2.8 體內(nèi)檢測CLAN_(siBTK)對B細胞和巨噬細胞BTK表達水平的下調(diào)
        3.2.9 CLAN_(siBTK)對膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎的治療
        3.2.10 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 陽離子納米顆粒促進免疫細胞的攝取
        3.3.2 CLAN_(siRNA)的制備和表征
        3.3.3 體外檢測CLAN_(siBTK)對B細胞和巨噬細胞BTK基因表達的沉默
        3.3.4 CLAN_(siBTK)對CIA的治療
        3.3.5 CLAN_(siBTK)治療后CIA模型小鼠的促炎性因子表達水平變化
    3.4 本章小結(jié)
    參考文獻
附錄一 主要儀器設(shè)備
附錄二 常規(guī)試劑
附錄三 主要溶液配制
附錄四 常規(guī)實驗方法
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與取得的其他研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Immunotherapy in gastric cancer[J]. Satoko Matsueda,David Y Graham.  World Journal of Gastroenterology. 2014(07)



本文編號：3597211