目的分析在胰島素、阿苯達唑和人工胃液刺激下,細粒棘球蚴原頭節(jié)miR-71的分泌表達特征。方法從新疆屠宰場采集綿羊肝、肺細粒棘球蚴包囊,經固定、包埋及切片后,用miR-71探針進行雜交。與異硫氰酸熒光素（FITC）標記的抗Digoxin抗體（Anti-Digoxin-FITC）作用,經4’, 6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）核酸染料染色后,在熒光顯微鏡下觀察miR-71在包囊壁和原頭節(jié)中的定位,分析miR-71在原頭節(jié)中的分布,確定miR-71在原頭節(jié)中的表達情況。在人工胃液（人工胃液組）、胰島素（胰島素組）或阿苯達唑（阿苯達唑組）等不同條件下培養(yǎng)原頭節(jié),收集上清并用差速離心法分離外泌體,采用透射電鏡觀察外泌體形態(tài)結構,利用納米粒徑分析儀測定外泌體的粒徑分布;利用外泌體生物標志分子烯醇化酶和14-3-3蛋白的抗體蛋白質免疫印跡（Western blotting）鑒定外泌體;采用實時熒光定量PCR（qPCR）檢測外泌體中miR-71的豐度。結果原位雜交結果顯示,miR-71在囊壁生發(fā)層和原頭節(jié)中均有表達。人工胃液組、胰島素組和阿苯達唑組原頭節(jié)分泌的外泌體粒徑分別為48.9、 49.7和... 

【文章來源】：中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志. 2020,38(02)北大核心CSCD

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原位雜交法觀察miR-71在細粒棘球蚴原頭節(jié)中的表達（×400)

圖1 原位雜交法觀察miR-71在細粒棘球蚴原頭節(jié)中的表達（×400)圖3 人工胃液（A）、胰島素（B）和阿苯達唑（C）處理后細粒棘球蚴原頭節(jié)外泌體中miR-71的qPCR檢測結果

圖2 胰島素、人工胃液和阿苯達唑處理的細粒棘球蚴原頭節(jié)外泌體的電子顯微鏡(A)、Western blotting(B)和粒徑(C)分析鑒定基于以上結果，可能提示以下機制：細粒棘球蚴隨著寄生宿主的改變，其寄生環(huán)境也隨之改變。而外部環(huán)境的刺激是推動細粒棘球蚴不斷發(fā)育的重要因素。其中miR-71在細粒棘球蚴原頭節(jié)中廣泛表達，當蟲體分別受到胰島素、人工胃液和阿苯達唑的刺激后，其分泌表達水平也隨之上升。提示miR-71是細粒棘球蚴耐受不同環(huán)境因素刺激的關鍵調節(jié)劑，可能在細粒棘球蚴的感染與發(fā)育過程發(fā)揮著重要的生物學功能。

【參考文獻】：
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