目的利用同源重組技術(shù)構(gòu)建金黃色葡萄球菌Newman RNAⅢ基因敲除株,探究RNAⅢ敲除對金葡菌γ-溶血素表達(dá)調(diào)控的影響。方法分別擴(kuò)增RNAⅢ基因的上下游同源臂,根據(jù)同源重組原理,構(gòu)建pBT2基因敲除載體,利用同源重組技術(shù),構(gòu)建RNAⅢ敲除株。并對野生株和敲除株γ-溶血素的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平進(jìn)行研究。結(jié)果實(shí)時熒光定量PCR結(jié)果顯示RNAⅢ敲除株γ-溶血素A/B/C亞基的轉(zhuǎn)錄水平較野生株顯著降低, Western blot檢測結(jié)果也顯示敲除株γ-溶血素蛋白表達(dá)水平較野生株明顯減少。結(jié)論 RNAⅢ敲除可顯著影響金葡菌γ-溶血素的表達(dá)。 

【文章來源】：第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,42(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

pBT2∷ΔRNAⅢ重組質(zhì)粒構(gòu)建

△RNAⅢ/Newman敲除株的PCR鑒定

培養(yǎng)Newman野生株及RNAⅢ敲除株,于對數(shù)生長期收集菌液,離心集菌后提取細(xì)菌總RNA,逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA,采用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)對γ-溶血素亞基hlgA、hlgBC基因的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行分析。結(jié)果表明RNAⅢ敲除后,hlgA、hlgBC(hlg2)的表達(dá)均顯著下調(diào)(P<0.01,圖3),證明RNAⅢ可以正調(diào)控γ-溶血素的轉(zhuǎn)錄。2.4 △RNAⅢ/Newman敲除株培養(yǎng)上清蛋白分析


本文編號：3586356