研制了一種新型冠狀病毒（coronavirus, SARS-CoV-2）體外轉(zhuǎn)錄RNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),用于SARS-CoV-2病毒RNA檢測的量值溯源.目標(biāo)基因范圍涵蓋已公布的SARS-CoV-2病毒檢測的3個主要靶標(biāo)基因:核殼蛋白N基因全長（基因組坐標(biāo):28274-29533, GenBank:MT027064.1）、包膜蛋白E基因全長（基因組坐標(biāo):26245-26472, GenBank:MT027064.1）、開放閱讀框1ab（ORF1ab）基因片段（基因組坐標(biāo):13321-15540, GenBank:MT027064.1）.通過采用數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（digital PCR, dPCR）方法進(jìn)行多實(shí)驗(yàn)室聯(lián)合定值,確定了該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量值為N、E和ORF1ab基因的拷貝數(shù)濃度.研究結(jié)果表明,該RNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量值可靠,均勻性良好,穩(wěn)定性可滿足運(yùn)輸要求.進(jìn)一步地,通過在臨床檢驗(yàn)、多家不同原理的病毒檢測試劑盒生產(chǎn)企業(yè)、方法開發(fā)實(shí)驗(yàn)室等試用,驗(yàn)證了RNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的普適性.這一RNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制為新型冠狀病毒檢測試劑盒的質(zhì)量控制提供了計量學(xué)依據(jù),為防控流行性疾病提供了便利. 

【文章來源】：科學(xué)通報. 2020,65(22)北大核心EICSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

(網(wǎng)絡(luò)版彩色)SARS-CoV-2 RNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)生物分析儀分析結(jié)果.(a)生物分析儀分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中3個RNA分子的條帶圖(帶L:RNA ladder;條帶1～2:N基因RNA片段;條帶3～4:E基因RNA片段;條帶5～6:ORF1ab RNA片段);(b)生物分析儀分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中3個RNA分子的歸一化峰圖

圖1(網(wǎng)絡(luò)版彩色)SARS-CoV-2 RNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)生物分析儀分析結(jié)果.(a)生物分析儀分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中3個RNA分子的條帶圖(帶L:RNA ladder;條帶1～2:N基因RNA片段;條帶3～4:E基因RNA片段;條帶5～6:ORF1ab RNA片段);(b)生物分析儀分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中3個RNA分子的歸一化峰圖2.3 RNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均勻性分析結(jié)果

為確保RNA在運(yùn)輸條件下(干冰運(yùn)輸)的穩(wěn)定,對RNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行短期穩(wěn)定性考察[22].考察了RNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在4和-20°C條件下保存13 d的短期穩(wěn)定性.實(shí)驗(yàn)中利用dPCR法測定標(biāo)物的拷貝數(shù)濃度,將各基因的拷貝數(shù)濃度采用線性模型進(jìn)行分析(此處以E基因的變化情況為例).RNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在-20和4°C溫度條件下的短期穩(wěn)定性統(tǒng)計結(jié)果表明斜率不顯著(圖4(c),(d)).同時,如果比較E基因首次dPCR定值結(jié)果,及其在-20和4°C保存13 d之后的dPCR定值結(jié)果,發(fā)現(xiàn)-20°C保存后P值為0.644,在4°C保存后P值為0.445,P值均大于0.05說明RNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在-20和4°C下保存后,量值沒有發(fā)生顯著變化,證明可以在4°C條件下保存13 d,足夠滿足樣品冷鏈運(yùn)輸需求.2.5 dPCR多家單位聯(lián)合定值分析及不確定度評估

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]新型冠狀病毒核酸檢測分析[J]. 李振昊,高小玲,楊小娟,徐輝.  檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床. 2020(10)
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本文編號：3572408