目的探討甲基-CpG結合蛋白1（methyl-CpG-binding domain protein 1,MBD1）缺失小鼠緩解弗氏完全佐劑（CFA）誘導的炎性疼痛是否通過抑制神經(jīng)傳導通路中的降鈣素基因相關肽（CGRP）來實現(xiàn)的,為MBD1調(diào)控炎性疼痛的神經(jīng)生物學機制提供新的思路。方法 （1）取8周齡雄性MBD1敲除小鼠（KO）和與KO小鼠年齡、性別和體質(zhì)量配對C57BL6小鼠（WT）,按隨機數(shù)字表法分為4組,分別為做足底注射生理鹽水（NS）、CFA的WT小鼠組和注射NS、CFA的KO小鼠組（每組7只）。觀察藥物前1天（-1 d）、注射后2 h、1、3、7和14 d 4組小鼠機械縮足反應頻率（PWF）和熱縮足反應潛伏期（PWL）行為改變;（2）另取CFA注射后1 d（疼痛最明顯點）上述組小鼠（每組3只）,分別提取患側背根神經(jīng)節(jié)（DRG）和脊髓背角組織行ELISA法檢測CGRP含量,比較4組含量變化。結果 （1）與WT小鼠比較,KO小鼠CFA注射前明顯降低雙側后爪基礎PWF和延長PWL;與注射生理鹽水的WT小鼠組比較,CFA注射后2 h、1、3、7和14 d WT小鼠患側PWF增加（P &... 

【文章來源】：實用醫(yī)學雜志. 2020,36(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

4 組小鼠患側PWF的比較（n=7)

4 組小鼠對側PWF的比較（n=7)

由美國羅格斯大學新澤西醫(yī)學院提供的只雄小鼠（純合子）和只雌小鼠（雜合子），該小鼠的遺傳背景為C57BL/6。因雌MBD1-/-純合子小鼠生育力極低，本研究采用一只MBD1-/-純合子雄鼠和一只MBD1+/-雜合子雌鼠同居交配繁育的方式進行繁殖。新生小鼠出生第5～7 d時，無菌條件下將小鼠距離尾端3 mm的鼠尾組織剪斷，標記后置于離心管中。每個離心管中各加入600μL 50 mmol/L的NaOH溶液，置于99℃金屬浴中煮20 min。冷卻至室溫后，將每個離心管中各加入100μL 1M Tris-HCl(pH-7.4），混勻后轉移到離心機中以10 000 g離心管5 min。轉移上清100μL至新的離心管中可存于-20℃冰箱備用。18μL PCR反應體系：GoTaq Green Master Mix,2×（Promega公司，M7122)9.0μL，上下游引物混合物1μL,DNA模板2μL,dH2O 6.0μL。反應條件為：第1步94°C 1 min預變性，第2步94℃變性1 min,63℃退火1 min,72℃延伸1 min，共40個循環(huán)，第3步72℃5 min，第4步冷卻到20℃后反應結束。取10μL PCR產(chǎn)物加入含6μL溴化乙啶的100 mL電泳緩沖液制備的2%瓊脂糖膠板上樣孔內(nèi)，電泳槽中電泳（135 V)20 min，然后置入凝膠成像儀中進行成像保存并觀察電泳條帶，依照特定的基因條帶對各個小鼠的基因型進行鑒定（圖1）。基因型鑒定引物序列：WT正義鏈5"-TCTTCTCAGACTGAGGAAGGGTGA-3"，反義鏈：5"-CAAGGTCCAACGCCACTGAACAT-3",350 bp;KO正義鏈：5"-GGATTCTCCGTGGGAACAAACG-3"，反義鏈：5"-CAAGGTCCAACGCCACTGAACAT-3",450 bp。1.3 CFA慢性炎性痛模型制備

【參考文獻】：
期刊論文
[1]帕瑞昔布鈉對神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓膠質(zhì)細胞活化的影響[J]. 鄧慧,周揚,徐巖,楊靜,扶超,屠偉峰.  實用醫(yī)學雜志. 2019(16)
[2]神經(jīng)病理性痛小鼠背根神經(jīng)節(jié)γ氨基丁酸受體亞型基因表達的變化[J]. 磨凱,郭雯靜,徐世元.  中華麻醉學雜志. 2018 (09)



本文編號：3567016