發(fā)布時間：2021-12-30 14:44

　　研究冠脈血管的發(fā)育,明確冠脈血管平滑肌細胞（coronary smooth muscle cells,CoSMCs）的起源及分化機制,將為先天性心臟病的防治及心肌梗死后冠脈側(cè)枝循環(huán)血管的形成等研究領(lǐng)域提供重要信息。目前研究提示,心外膜祖細胞（Epicardial progenitor cells,EPCs）是CoSMCs的主要起源,但EPCs向CoSMCs分化的具體機制尚不完全明確。自噬（autophagy）是由溶酶體介導的蛋白質(zhì)及其他細胞器的分解過程,與衰老的細胞器及破壞的蛋白質(zhì)的清除和維持細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定有密切關(guān)系。既往研究證實自噬在哺乳動物的心臟發(fā)育與重塑組織和細胞分化過程起著重要作用,但尚無證據(jù)表明自噬是否能夠參與調(diào)控EPCs向CoSMCs分化。在本研究中,我們成功體外培育了小鼠原代EPCs,并通過自噬的誘導和抑制實驗觀察自噬對EPCs向平滑肌細胞分化的影響,同時進一步在體觀察自噬對小鼠冠脈平滑肌發(fā)育的影響,以期證實自噬參與調(diào)控心外膜祖細胞向冠狀動脈平滑肌細胞分化。第一部分:原代EPCs的培養(yǎng)與鑒定目的:探討構(gòu)建高純度心外膜祖細胞的方法,為體外培養(yǎng)并揭示心外膜祖細胞的分化機制奠定... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

原代心外膜細胞培養(yǎng)步驟示意圖

圖 2 心外膜祖細胞的培養(yǎng)及 72h 內(nèi)觀察Figure2：culture and 72h observation of epicardial progenitor cells2.2 原代心外膜祖細胞的鑒定為進一步鑒定培養(yǎng)的原代細胞性質(zhì)，我們通過細胞免疫熒光染色方法觀察心外膜祖細胞標志基因 Wt1 和 Tbx18 的表達情況。原代培養(yǎng) 3 天，細胞免疫熒光染色顯示培養(yǎng)的大多數(shù)細胞表達 EPCs 特異性標志物 Wt1 及 Tbx18，同時觀察到多數(shù)細胞為 Wt1 及 Tbx18 雙陽性細胞。個別細胞未能表達 Wt1 或 Tbx18。同時，以原代心肌細胞作為對照，通過 qPCR 發(fā)現(xiàn)我們所培養(yǎng)的細胞群高表達 Tbx18 及 Wt1的 mRNA，而幾乎不表達心肌細胞標志物 cTnT。結(jié)合組織來源、細胞形態(tài)及特異性標志物的表達均證實我們所培養(yǎng)出的細胞為胚胎 EPCs。

圖 3 心外膜祖細胞的鑒定。EPC 特異性標記物 WT1 和 Tbx18 在培養(yǎng)細胞中呈陽性共表達疫熒光染色)，而白色箭頭所示為少數(shù)個細胞不表達 EPC 標記物，標尺為 50μm。EPCs 和肌細胞中 Tbx18、Wt1 與 cTnT(心肌細胞標志物)表達的 qRT-PCR 分析(p < 0.01)。數(shù)個實的 x±s(Student's t 檢驗)表示。Figure 3: Identification of epicardial progenitor cells. EPC specific markers Wt1 and Tbpositively co-expressed in the cultured cells (by immunofluorescence staining), yet a singlewhich did not express the EPC markers wasshown by the white arrow. Scale bar was 50 (C): qRT-PCR analyses of Tbx18, Wt1 vs. cTnT (cardiomyocyte marker) expression in Eand cardiomyocytes (p < 0.01). The data were presented as the means ± SD of thexperiments, Student's t-test.3 討論


本文編號：3558412