自噬參與心外膜祖細(xì)胞向冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究
發(fā)布時(shí)間：2021-12-30 14:44
研究冠脈血管的發(fā)育,明確冠脈血管平滑肌細(xì)胞（coronary smooth muscle cells,CoSMCs）的起源及分化機(jī)制,將為先天性心臟病的防治及心肌梗死后冠脈側(cè)枝循環(huán)血管的形成等研究領(lǐng)域提供重要信息。目前研究提示,心外膜祖細(xì)胞（Epicardial progenitor cells,EPCs）是CoSMCs的主要起源,但EPCs向CoSMCs分化的具體機(jī)制尚不完全明確。自噬（autophagy）是由溶酶體介導(dǎo)的蛋白質(zhì)及其他細(xì)胞器的分解過(guò)程,與衰老的細(xì)胞器及破壞的蛋白質(zhì)的清除和維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定有密切關(guān)系。既往研究證實(shí)自噬在哺乳動(dòng)物的心臟發(fā)育與重塑組織和細(xì)胞分化過(guò)程起著重要作用,但尚無(wú)證據(jù)表明自噬是否能夠參與調(diào)控EPCs向CoSMCs分化。在本研究中,我們成功體外培育了小鼠原代EPCs,并通過(guò)自噬的誘導(dǎo)和抑制實(shí)驗(yàn)觀察自噬對(duì)EPCs向平滑肌細(xì)胞分化的影響,同時(shí)進(jìn)一步在體觀察自噬對(duì)小鼠冠脈平滑肌發(fā)育的影響,以期證實(shí)自噬參與調(diào)控心外膜祖細(xì)胞向冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分化。第一部分:原代EPCs的培養(yǎng)與鑒定目的:探討構(gòu)建高純度心外膜祖細(xì)胞的方法,為體外培養(yǎng)并揭示心外膜祖細(xì)胞的分化機(jī)制奠定...
【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市
【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
原代心外膜細(xì)胞培養(yǎng)步驟示意圖
圖 2 心外膜祖細(xì)胞的培養(yǎng)及 72h 內(nèi)觀察Figure2：culture and 72h observation of epicardial progenitor cells2.2 原代心外膜祖細(xì)胞的鑒定為進(jìn)一步鑒定培養(yǎng)的原代細(xì)胞性質(zhì)，我們通過(guò)細(xì)胞免疫熒光染色方法觀察心外膜祖細(xì)胞標(biāo)志基因 Wt1 和 Tbx18 的表達(dá)情況。原代培養(yǎng) 3 天，細(xì)胞免疫熒光染色顯示培養(yǎng)的大多數(shù)細(xì)胞表達(dá) EPCs 特異性標(biāo)志物 Wt1 及 Tbx18，同時(shí)觀察到多數(shù)細(xì)胞為 Wt1 及 Tbx18 雙陽(yáng)性細(xì)胞。個(gè)別細(xì)胞未能表達(dá) Wt1 或 Tbx18。同時(shí)，以原代心肌細(xì)胞作為對(duì)照，通過(guò) qPCR 發(fā)現(xiàn)我們所培養(yǎng)的細(xì)胞群高表達(dá) Tbx18 及 Wt1的 mRNA，而幾乎不表達(dá)心肌細(xì)胞標(biāo)志物 cTnT。結(jié)合組織來(lái)源、細(xì)胞形態(tài)及特異性標(biāo)志物的表達(dá)均證實(shí)我們所培養(yǎng)出的細(xì)胞為胚胎 EPCs。
圖 3 心外膜祖細(xì)胞的鑒定。EPC 特異性標(biāo)記物 WT1 和 Tbx18 在培養(yǎng)細(xì)胞中呈陽(yáng)性共表達(dá)疫熒光染色)，而白色箭頭所示為少數(shù)個(gè)細(xì)胞不表達(dá) EPC 標(biāo)記物，標(biāo)尺為 50μm。EPCs 和肌細(xì)胞中 Tbx18、Wt1 與 cTnT(心肌細(xì)胞標(biāo)志物)表達(dá)的 qRT-PCR 分析(p < 0.01)。數(shù)個(gè)實(shí)的 x±s(Student's t 檢驗(yàn))表示。Figure 3: Identification of epicardial progenitor cells. EPC specific markers Wt1 and Tbpositively co-expressed in the cultured cells (by immunofluorescence staining), yet a singlewhich did not express the EPC markers wasshown by the white arrow. Scale bar was 50 (C): qRT-PCR analyses of Tbx18, Wt1 vs. cTnT (cardiomyocyte marker) expression in Eand cardiomyocytes (p < 0.01). The data were presented as the means ± SD of thexperiments, Student's t-test.3 討論
本文編號(hào)：3558412
【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市
【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
原代心外膜細(xì)胞培養(yǎng)步驟示意圖
圖 2 心外膜祖細(xì)胞的培養(yǎng)及 72h 內(nèi)觀察Figure2：culture and 72h observation of epicardial progenitor cells2.2 原代心外膜祖細(xì)胞的鑒定為進(jìn)一步鑒定培養(yǎng)的原代細(xì)胞性質(zhì)，我們通過(guò)細(xì)胞免疫熒光染色方法觀察心外膜祖細(xì)胞標(biāo)志基因 Wt1 和 Tbx18 的表達(dá)情況。原代培養(yǎng) 3 天，細(xì)胞免疫熒光染色顯示培養(yǎng)的大多數(shù)細(xì)胞表達(dá) EPCs 特異性標(biāo)志物 Wt1 及 Tbx18，同時(shí)觀察到多數(shù)細(xì)胞為 Wt1 及 Tbx18 雙陽(yáng)性細(xì)胞。個(gè)別細(xì)胞未能表達(dá) Wt1 或 Tbx18。同時(shí)，以原代心肌細(xì)胞作為對(duì)照，通過(guò) qPCR 發(fā)現(xiàn)我們所培養(yǎng)的細(xì)胞群高表達(dá) Tbx18 及 Wt1的 mRNA，而幾乎不表達(dá)心肌細(xì)胞標(biāo)志物 cTnT。結(jié)合組織來(lái)源、細(xì)胞形態(tài)及特異性標(biāo)志物的表達(dá)均證實(shí)我們所培養(yǎng)出的細(xì)胞為胚胎 EPCs。
圖 3 心外膜祖細(xì)胞的鑒定。EPC 特異性標(biāo)記物 WT1 和 Tbx18 在培養(yǎng)細(xì)胞中呈陽(yáng)性共表達(dá)疫熒光染色)，而白色箭頭所示為少數(shù)個(gè)細(xì)胞不表達(dá) EPC 標(biāo)記物，標(biāo)尺為 50μm。EPCs 和肌細(xì)胞中 Tbx18、Wt1 與 cTnT(心肌細(xì)胞標(biāo)志物)表達(dá)的 qRT-PCR 分析(p < 0.01)。數(shù)個(gè)實(shí)的 x±s(Student's t 檢驗(yàn))表示。Figure 3: Identification of epicardial progenitor cells. EPC specific markers Wt1 and Tbpositively co-expressed in the cultured cells (by immunofluorescence staining), yet a singlewhich did not express the EPC markers wasshown by the white arrow. Scale bar was 50 (C): qRT-PCR analyses of Tbx18, Wt1 vs. cTnT (cardiomyocyte marker) expression in Eand cardiomyocytes (p < 0.01). The data were presented as the means ± SD of thexperiments, Student's t-test.3 討論
本文編號(hào)：3558412
本文鏈接：http://sikaile.net/yixuelunwen/jichuyixue/3558412.html
最近更新
教材專著
