腸道病毒屬于小核糖核酸病毒科,是單股正鏈RNA病毒,能夠引起包括呼吸系統(tǒng)疾病、心肌炎、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病以及手足口病在內(nèi)的很多人類疾病,對(duì)世界公共衛(wèi)生安全造成了很大威脅,EV71、CA6和EVD68都是腸道病毒中致病性很強(qiáng)的病原體。A3G是APOBEC家族的成員,具有胞嘧啶脫氨酶的活性以及RNA結(jié)合活性,對(duì)于Vif缺陷的HIV-1具有強(qiáng)烈的抗病毒作用。同時(shí),A3G也能夠限制其他逆轉(zhuǎn)錄病毒以及DNA病毒的復(fù)制,具有廣譜的抗病毒作用。在我們最新的研究中也發(fā)現(xiàn),A3G對(duì)于EV71這種小核糖核酸病毒同樣具有抑制作用。病毒在不斷地復(fù)制繁衍中也進(jìn)化出了很多拮抗宿主免疫系統(tǒng)的能力,例如HIV-1 Vif通過(guò)蛋白酶體途徑降解A3G等。在之前的研究中,我們發(fā)現(xiàn)了EV71感染的細(xì)胞中A3G蛋白水平的下調(diào),這可能是EV71拮抗A3G限制作用導(dǎo)致的,因此我們探究了其中的機(jī)制。我們發(fā)現(xiàn),EV71 2C蛋白能夠以自噬依賴的方式誘導(dǎo)A3G的降解。首先我們考察了包括2A、2B、2C和3C等在內(nèi)的EV71非結(jié)構(gòu)蛋白是否誘導(dǎo)A3G降解,發(fā)現(xiàn)只有2C具有這一功能。在加入了溶酶體抑制劑Baf A1之后,與對(duì)照組相比A3G的蛋白...

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中文摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 腸道病毒
        1.1.1 腸道病毒概述
        1.1.2 腸道病毒與細(xì)胞自噬
    1.2 腸道病毒A71型
    1.3 腸道病毒D68 型與柯薩奇病毒A6型
    1.4 APOBEC3G蛋白
        1.4.1 APOBEC家族
        1.4.2 APOBEC3G抗病毒功能
    1.5 創(chuàng)新點(diǎn)
第2章 材料與方法
    2.1 儀器、材料與試劑
        2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.2 主要試劑與材料
        2.1.3 質(zhì)粒、細(xì)胞系與病毒毒株
        2.1.4 引物合成與質(zhì)粒測(cè)序
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 突變質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.2 細(xì)胞復(fù)蘇、細(xì)胞傳代與轉(zhuǎn)染
        2.2.3 Western blot實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 免疫熒光共定位實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 病毒擴(kuò)增、病毒滴度測(cè)定與病毒的超速離心
        2.2.7 熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 RT-qPCR
        2.2.9 shPCBP1-RD細(xì)胞系的構(gòu)建
第3章 結(jié)果與討論
    3.1 EV712C降低A3G的表達(dá)
    3.2 EV712C誘導(dǎo)A3G降解與自噬-溶酶體途徑有關(guān)
    3.3 EV712C與A3G具有直接的相互作用
    3.4 EV712C降解A3G所必需的功能區(qū)
    3.5 EV712C誘導(dǎo)自噬并通過(guò)自噬-溶酶體途徑降解A3G
    3.6 2C蛋白自噬依賴的A3G降解功能具有普遍性
    3.7 A3G限制EVD68病毒而不是CA6病毒復(fù)制
    3.8 A3G通過(guò)抑制EVD685'UTR活性抑制病毒復(fù)制
    3.9 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]手足口病的流行及防控策略研究進(jìn)展 [J]. 覃敏蘭.  職業(yè)與健康. 2018(21)



本文編號(hào)：3552221