目的:構(gòu)建含有促甲狀腺激素受體抗體（TRAb）單鏈抗體的重組載體pFastBac^TM1-ScFv-IgG1Fc,通過Bac-to-Bac表達(dá)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)單鏈抗體融合蛋白的高效表達(dá),并檢測目的蛋白表達(dá)和免疫學(xué)活性。方法:TRAb抗體的重鏈可變區(qū)（HV）和輕鏈可變區(qū)（LV）的序列以linker（G4S）連接,構(gòu)建ScFv;Genbank檢索人IgG1Fc序列,SnapGene軟件分析上述序列和載體pFastBac^TM1,以基因合成方式構(gòu)建重組質(zhì)粒pFastBac^TM1-ScFv-IgG1Fc;pFastBac^TM1-ScFv-IgG1Fc轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌DH10Bac生成重組桿粒,pUC/M13正向和反向引物進(jìn)行PCR分析確認(rèn)目的基因的序列;重組桿粒采用Cellfectin?Ⅱ試劑轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞Sf9生成P1病毒儲液,繼續(xù)感染Sf9生成高滴度的P2和P3病毒儲液;P3病毒儲液感染High Five^TM細(xì)胞,收集上清通過SPA-Sepharose CL-4B親和層析純化獲得較純的單鏈抗體... 

【文章來源】：中國免疫學(xué)雜志. 2020,36(14)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒構(gòu)建圖

重組桿粒的PCR驗(yàn)證

2.4 目的蛋白與TSHR結(jié)合力結(jié)果顯示甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞周圍呈現(xiàn)出棕黃色,提示目的蛋白與TSHR具有較高結(jié)合力(圖5)。圖4 ECLIA檢測抗體活性濃度

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]抗CD20單鏈抗體融合顯性抗原肽的原核表達(dá)和其抑瘤活性研究[J]. 孫蕊,朱琰,馮海涼,卞曉翠,顧蓓,王春景,劉玉琴.  中國免疫學(xué)雜志. 2015(04)



本文編號：3549279