目的探討中性鞘磷脂酶2對缺氧預(yù)處理骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體生物學(xué)特性的影響。方法分離并體外擴(kuò)增6周齡C57BL/6小鼠來源的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,收集細(xì)胞上清,分離來自缺氧處理的外泌體（Exo^H）和常氧下培養(yǎng)來源的外泌體（Exo^N）,并鑒定其生物學(xué)特性。比較Exo^H和Exo^N在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中對心肌細(xì)胞保護(hù)作用的差異,同時收集在缺氧預(yù)處理狀態(tài)下加入中性鞘磷脂酶2抑制劑GW4869來源的外泌體（Exo^H+GW）,并在體外實(shí)驗(yàn)中比較Exo^N、Exo^H和Exo^H+GW對心肌細(xì)胞抗凋亡及血管新生能力的作用。結(jié)果 Exo^H組小鼠心肌梗死后28 d的射血分?jǐn)?shù)顯著高于Exo^N組（44.12%±8.12%比20.73%±7.32%,n=20,t=11.95,P<0.05）。同時發(fā)現(xiàn),缺氧增加中性鞘磷脂酶2的表達(dá),而Exo^H+GW組在體外管腔形成及心肌細(xì)胞保護(hù)方面明... 

【文章來源】：中國心血管雜志. 2020,25(03)

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【部分圖文】：

骨髓MSCs來源的外泌體鑒定

在小鼠心肌梗死后7、14和28 d,ExoH組小鼠心功能較ExoN組、PBS組均有明顯改善,其中28 d時ExoH組小鼠射血分?jǐn)?shù)顯著高于ExoN組(44.12%±8.12%比20.73±7.32%,n=20,t=11.95,P<0.05,圖2A),并且28 d組織學(xué)分析表明ExoH能顯著減少心肌梗死后瘢痕面積(各組梗死面積百分比:PBS組55.42%±4.32%,ExoN組44.62%±4.21%,ExoH組34.15%±5.32%,n=8,P<0.05,圖2B)。2.3 缺氧增加nSMase2的表達(dá)可能是由缺氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)調(diào)控的

與常氧下比較,缺氧預(yù)處理后,MSCs中的nSMase2的表達(dá)明顯升高,nSMase2蛋白水平升高約1.5倍,而mRNA水平升高約5.4倍,n=10,P<0.05(圖3A)。我們已知Hif-1α可在缺氧狀態(tài)下被激活并參與重要調(diào)控。為進(jìn)一步研究nSMase2與Hif-1α的關(guān)系,我們采用DMOG,一種HIF-1α羥化酶抑制劑,避免Hif-1α在常氧下分解。研究發(fā)現(xiàn),加入DMOG后的MSCs中nSMase2和HIF-1α表達(dá)一致性增加,nSMase2和HIF-1α分別升高2.1倍和2.5倍,n=8,P<0.05(圖3B),因此考慮nSMase2可能是由HIF-1α調(diào)控的。2.4 nSMase2抑制劑GW4869削弱ExoH的促血管新生能力


本文編號：3539183