本課題組前期以MUC1為靶點制備了重組MUC1-MBP融合蛋白抗腫瘤疫苗。在疫苗佐劑的篩選中發(fā)現(xiàn),TLR9受體激動劑CpG ODN1826（CpG1826）聯(lián)合MUC1-MBP不僅能誘導MUC1特異性的體液免疫應答,而且還能誘導細胞免疫應答,能抑制皮下移植黑色素瘤B16-MUC1在小鼠體內(nèi)的生長,但腫瘤抑制效果仍然不理想、個體差異較大,因此我們試圖通過改變劑型來增強MUC1-MBP的抗腫瘤作用。MF59是一種水包油的乳劑,可以明顯增強抗原提呈細胞（APC）對抗原的攝取,最早應用于流感疫苗,是誘導Th2應答的佐劑。近年有研究發(fā)現(xiàn),MF59與CpG ODN（CpG）聯(lián)合可以抑制腫瘤生長,但其作為腫瘤疫苗佐劑的應用價值還沒有進行深入探討,作用機制還不十分清楚。因此,本研究首先探討MF59與CpG 1826作為MUC1-MBP疫苗的復合佐劑在小鼠體內(nèi)誘導的免疫活性。結(jié)果顯示,與單獨佐劑CpG 1826比較,復合佐劑MF59/CpG 1826聯(lián)合MUC1-MBP更顯著誘導MUC1特異性的Th1應答和CTL殺傷。進一步通過荷瘤小鼠發(fā)現(xiàn),MF59/CpG 1826聯(lián)合MUC1-MBP誘導的強大的Th... 

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小鼠肌肉注射疫苗佐劑誘導的轉(zhuǎn)錄譜的基因芯片分析

根據(jù)腫瘤大小繪制腫瘤生長曲線。使用單因素方差分析（ANOVA）實驗數(shù)據(jù)。當主要實驗結(jié)果統(tǒng)計學差異顯著時，采用雙側(cè) T 檢驗比較個體治療的平均值。通過 Kaplan-Meier 方法評估生存期并用對數(shù)檢驗評估。P < 0.05 被認為具有統(tǒng)計學顯著性。所有統(tǒng)計分析均使用 SPSS 18.0 軟件進行。2.3 實驗結(jié)果2.3.1 MF59 粒徑的檢測本研究按照常規(guī)方法制備了 MF59，通過粒度儀對 MF59 粒徑進行檢測，粒徑大小如圖 2.1A 所示，有效粒徑是 7.7 nm，均一度是 0.229，均一度小于 0.7，說明均一度良好，并且在制備 6 個月后再次對粒徑進行了檢測，如圖 2.1B 所示，粒徑大小穩(wěn)定，可以用于后續(xù)的實驗研究。

表 2.1 電位分析儀檢測 MF59 粒徑Table 2.1 The particle size analysis of MF59 adjuvant by potential analyzer (n=3)Sample 均一度 有效粒徑初次制備 0.229 7.7 nm制備 6 個月后 0.200 7.4 nm2.3.2 流式細胞儀鑒定 B16-MUC1 細胞中 MUC1 的表達B16-MUC1 是本課題組前期制備的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染了人 MUC1 全長基因的 B16 細胞，簡稱 B16-MUC1，作為靶細胞在 MUC1-MBP 疫苗誘導的 MUC1 特異殺傷活性研究中使用。細胞用含 G418 的培養(yǎng)液培養(yǎng)并傳代 3 次，取對數(shù)生長期的細胞進行研究，采用流式細胞儀對 MUC1 的表達進行了鑒定，結(jié)果如圖 2.2 所示，MUC1 陽性表達率 99.2%，可用于后續(xù)實驗使用。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]CpG ODN-MF59輔佐腫瘤抗原誘導抗小鼠黑色素瘤及肺癌的實驗研究[D]. 楊明.吉林大學 2012

碩士論文
[1]IL-6抑制單核細胞來源樹突狀細胞CCR7表達的機制研究[D]. 李騰飛.第三軍醫(yī)大學 2015
[2]STAT3磷酸化抑制人單核細胞來源的樹突狀細胞成熟機制的初步研究[D]. 董宗明.第三軍醫(yī)大學 2014



本文編號：3514607