本課題組前期以MUC1為靶點(diǎn)制備了重組MUC1-MBP融合蛋白抗腫瘤疫苗。在疫苗佐劑的篩選中發(fā)現(xiàn),TLR9受體激動(dòng)劑CpG ODN1826（CpG1826）聯(lián)合MUC1-MBP不僅能誘導(dǎo)MUC1特異性的體液免疫應(yīng)答,而且還能誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答,能抑制皮下移植黑色素瘤B16-MUC1在小鼠體內(nèi)的生長(zhǎng),但腫瘤抑制效果仍然不理想、個(gè)體差異較大,因此我們?cè)噲D通過(guò)改變劑型來(lái)增強(qiáng)MUC1-MBP的抗腫瘤作用。MF59是一種水包油的乳劑,可以明顯增強(qiáng)抗原提呈細(xì)胞（APC）對(duì)抗原的攝取,最早應(yīng)用于流感疫苗,是誘導(dǎo)Th2應(yīng)答的佐劑。近年有研究發(fā)現(xiàn),MF59與CpG ODN（CpG）聯(lián)合可以抑制腫瘤生長(zhǎng),但其作為腫瘤疫苗佐劑的應(yīng)用價(jià)值還沒有進(jìn)行深入探討,作用機(jī)制還不十分清楚。因此,本研究首先探討MF59與CpG 1826作為MUC1-MBP疫苗的復(fù)合佐劑在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的免疫活性。結(jié)果顯示,與單獨(dú)佐劑CpG 1826比較,復(fù)合佐劑MF59/CpG 1826聯(lián)合MUC1-MBP更顯著誘導(dǎo)MUC1特異性的Th1應(yīng)答和CTL殺傷。進(jìn)一步通過(guò)荷瘤小鼠發(fā)現(xiàn),MF59/CpG 1826聯(lián)合MUC1-MBP誘導(dǎo)的強(qiáng)大的Th... 

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【部分圖文】：

小鼠肌肉注射疫苗佐劑誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄譜的基因芯片分析

根據(jù)腫瘤大小繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線。使用單因素方差分析（ANOVA）實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。當(dāng)主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著時(shí)，采用雙側(cè) T 檢驗(yàn)比較個(gè)體治療的平均值。通過(guò) Kaplan-Meier 方法評(píng)估生存期并用對(duì)數(shù)檢驗(yàn)評(píng)估。P < 0.05 被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。所有統(tǒng)計(jì)分析均使用 SPSS 18.0 軟件進(jìn)行。2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.3.1 MF59 粒徑的檢測(cè)本研究按照常規(guī)方法制備了 MF59，通過(guò)粒度儀對(duì) MF59 粒徑進(jìn)行檢測(cè)，粒徑大小如圖 2.1A 所示，有效粒徑是 7.7 nm，均一度是 0.229，均一度小于 0.7，說(shuō)明均一度良好，并且在制備 6 個(gè)月后再次對(duì)粒徑進(jìn)行了檢測(cè)，如圖 2.1B 所示，粒徑大小穩(wěn)定，可以用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)研究。

表 2.1 電位分析儀檢測(cè) MF59 粒徑Table 2.1 The particle size analysis of MF59 adjuvant by potential analyzer (n=3)Sample 均一度 有效粒徑初次制備 0.229 7.7 nm制備 6 個(gè)月后 0.200 7.4 nm2.3.2 流式細(xì)胞儀鑒定 B16-MUC1 細(xì)胞中 MUC1 的表達(dá)B16-MUC1 是本課題組前期制備的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染了人 MUC1 全長(zhǎng)基因的 B16 細(xì)胞，簡(jiǎn)稱 B16-MUC1，作為靶細(xì)胞在 MUC1-MBP 疫苗誘導(dǎo)的 MUC1 特異殺傷活性研究中使用。細(xì)胞用含 G418 的培養(yǎng)液培養(yǎng)并傳代 3 次，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行研究，采用流式細(xì)胞儀對(duì) MUC1 的表達(dá)進(jìn)行了鑒定，結(jié)果如圖 2.2 所示，MUC1 陽(yáng)性表達(dá)率 99.2%，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

【參考文獻(xiàn)】：
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