目的:探討重組人顆粒體蛋白前體（rhPGRN）對人軟骨細(xì)胞C28I2和小鼠巨噬細(xì)胞RAW264. 7增殖、自噬和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）的影響及作用機制。方法:采用Ni-NTA瓊脂糖樹脂對組氨酸標(biāo)簽蛋白進(jìn)行特異性親和純化,通過考馬斯亮藍(lán)染色、BCA法和Western blot驗證目的蛋白的濃度和純度。將細(xì)胞隨機分為對照組、rhPGRN組、U0126組、3-甲基腺嘌呤（3-MA）組、rhPGRN+U0126、rhPGRN+3-MA、rhPGRN+巴弗洛霉素A1（Baf-A1）和rhPGRN+4-苯基丁酸（4-PBA）組,采用細(xì)胞計數(shù)法、Western blot和RT-qPCR檢測rhPGRN對C28I2和RAW264. 7兩種不同類型細(xì)胞增殖、自噬和ERS的影響。結(jié)果:（1）在含有His標(biāo)簽的PGRN穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株中成功提取高純度、具有生物活性的人源重組蛋白rhPGRN。（2）rhPGRN能促進(jìn)C28I2和RAW264. 7細(xì)胞的增殖,促進(jìn)細(xì)胞周期相關(guān)分子（PCNA、cyclin B1和cyclin D1）的mRNA表達(dá)（P<0. 05）,上調(diào)細(xì)胞周期調(diào)控蛋白Ki67表達(dá),并提高增殖相關(guān)信... 

【文章來源】：中國病理生理雜志. 2020,36(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【部分圖文】：

rhPGRN的純度及濃度鑒定

rhPGRN對C28I2和RAW264.7細(xì)胞增殖的影響

rhPGRN對C28I2和RAW264.7細(xì)胞增殖相關(guān)信號通路的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PGRN基因沉默對人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞增殖及遷移的影響[J]. 孫艷婷,陳思成,李汪,李具瓊,朱穎,施瓊.  中國病理生理雜志. 2018(04)
[2]過表達(dá)PGRN抑制LPS誘導(dǎo)的肺泡上皮細(xì)胞損傷[J]. 尚立群,張永慶,苗毅,楊淑梅.  中國病理生理雜志. 2017(05)



本文編號：3513628