目的構(gòu)建靶向?qū)嶓w瘤微環(huán)境嵌合抗原受體T細(xì)胞（CAR-T細(xì)胞）,誘導(dǎo)微環(huán)境中IFN-γ的表達(dá),以達(dá)到抗腫瘤的目的。方法篩選核抗原特異性單克隆抗體,通過基因工程技術(shù)構(gòu)建嵌合抗原受體（CAR）;將CAR亞克隆到慢病毒載體后轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,包裝成表達(dá)CAR的慢病毒,轉(zhuǎn)導(dǎo)HEK293F細(xì)胞后,以流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CAR表達(dá)細(xì)胞比例判斷轉(zhuǎn)導(dǎo)效率;將CAR表達(dá)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)活化T細(xì)胞后形成CAR-T細(xì)胞,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)在不同抗原（核小體抗原、Brefeldin A、二者聯(lián)合）誘導(dǎo)下或核小體抗原單獨(dú)誘導(dǎo)0、2、48 h時(shí)CAR-T細(xì)胞分泌IFN-γ情況。結(jié)果在培養(yǎng)10～15 d時(shí),表達(dá)CAR的HEK293F細(xì)胞比例達(dá)53. 04%～87. 17%。在核小體抗原、Brefeldin A、二者聯(lián)合組誘導(dǎo)下,分泌IFN-γ的T細(xì)胞比例分別為0. 028%、0. 034%、3. 570%;核小體抗原誘導(dǎo)0、48 h時(shí)檢測(cè)不到分泌IFN-γ的CAR-T細(xì)胞,2 h時(shí)分泌IFN-γ的CAR-T細(xì)胞最多。結(jié)論成功構(gòu)建靶向核抗原的CAR-T細(xì)胞,且該細(xì)胞具有IFN-γ分泌功能。 

【文章來源】：山東醫(yī)藥. 2020,60(17)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

CAR在HEK293細(xì)胞的表達(dá)情況(流式細(xì)胞術(shù))

不同抗原誘導(dǎo)下，核小體抗原組、Brefeldin A組、聯(lián)合組分泌IFN-γ的T細(xì)胞比例分別為0.028%、0.034%、3.570%。核小體抗原誘導(dǎo)0、48 h時(shí)檢測(cè)不到分泌IFN-γ的CAR-T細(xì)胞，2 h時(shí)分泌IFN-γ的CAR-T細(xì)胞最多。見圖2。3 討論


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