為了比較內(nèi)源性的3-硝基酪氨酸與非天然的4-硝基苯丙氨酸在PD-L1疫苗中的引入對T細(xì)胞亞群分化的影響,利用遺傳密碼擴(kuò)充技術(shù),將這兩種免疫原性氨基酸分別引入到PD-L1疫苗的相同位點(diǎn),獲得具有3-硝基酪氨酸以及4-硝基苯丙氨酸的兩種PD-L1突變體。用這兩種突變體免疫小鼠,分析對小鼠脾臟T細(xì)胞亞群分化的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示,4-硝基苯丙氨酸在PD-L1疫苗中的引入可促進(jìn)Th1細(xì)胞的極化,同時降低Treg細(xì)胞的比例,3-硝基酪氨酸的引入對Th1細(xì)胞的極化無影響,同時能顯著提高Treg和Th17細(xì)胞的比例。二者在PD-L1疫苗中的引入均能促進(jìn)脾臟CD8⁺T細(xì)胞的應(yīng)答,其中含有4-硝基苯丙氨酸的PD-L1突變體應(yīng)答效果更強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與內(nèi)源性的3-硝基酪氨酸在PD-L1疫苗中的引入相比,非天然的4-硝基苯丙氨酸更適合用于腫瘤疫苗的設(shè)計。 

【文章來源】：中國藥科大學(xué)學(xué)報. 2020,51(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料
    1.1 試劑
    1.2 儀器
    1.3 動物
    1.4 菌種和質(zhì)粒
2 方法
    2.1 WT PD-L1疫苗分子的表達(dá)
    2.2 3-硝基酪氨酸和4-硝基苯丙氨酸取代的PD-L1表達(dá)菌株的構(gòu)建
    2.3 3-硝基酪氨酸和4-硝基苯丙氨酸取代的PD-L1蛋白的表達(dá)與純化
    2.4 動物分組及免疫方案
    2.5 流式細(xì)胞術(shù)測定各組對T細(xì)胞亞群分化的影響
    2.6 統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 3NO2Tyr11PD-L1和4NO2Phe11PD-L1菌株的構(gòu)建
    3.2 WT PD-L1、3NO2Tyr11PD-L1和4NO2Phe11PD-L1蛋白的表達(dá)
    3.3 WT PD-L1、3NO2Tyr11PD-L1、4NO2Phe11PD-L1蛋白的純化及Western blot鑒定
    3.4 4NO2Phe11PD-L1和3NO2Tyr11PD-L1免疫對小鼠脾臟內(nèi)Th1、Th2細(xì)胞亞群的影響
    3.5 4NO2Phe11PD-L1和3NO2Tyr11PD-L1免疫小鼠對脾臟內(nèi)Treg細(xì)胞比例的影響
    3.6 4NO2Phe11PD-L1以及3NO2Tyr11PD-L1免疫小鼠后脾臟內(nèi)Th17細(xì)胞比例
    3.7 4NO2Phe11PD-L1和3NO2Tyr11PD-L1免疫小鼠對脾臟內(nèi)CD8+T細(xì)胞的影響
4 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]含對硝基苯丙氨酸HER2疫苗的免疫原性研究[J]. 何羽,田浤,戴鑫,姚文兵,高向東.  中國藥科大學(xué)學(xué)報. 2018(03)



本文編號：3493601