目的建立穩(wěn)定的、能獲得清晰小鼠視網(wǎng)膜脈管系統(tǒng)、血管內(nèi)皮細(xì)胞及周細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)條件。方法將C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為正常對照組和糖尿病模型組。正常組小鼠按55 mg/kg的劑量腹腔注射檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液,模型組小鼠腹腔注射同等劑量的2%鏈脲佐菌素（STZ）溶液,連續(xù)注射5 d。待糖尿病模型組成模后3個(gè)月,2組同時(shí)取材,采用不同方法進(jìn)行視網(wǎng)膜脈管系統(tǒng)消化分離及鋪片。結(jié)果最佳方法為整只眼球在4%多聚甲醛中固定12 h,使用8%胰蛋白酶37℃單獨(dú)消化2～2.5 h,每隔1 h配合1 ml移液槍在蒸餾水中反復(fù)吹打直至視網(wǎng)膜變得薄而清透。此時(shí)獲得的視網(wǎng)膜脈管系統(tǒng)完整清晰,其他組織消化徹底,血管內(nèi)皮細(xì)胞和周細(xì)胞清晰可見。且與正常組相比,模型組非細(xì)胞性毛細(xì)血管增多（t=2.668,P=0.024）。結(jié)論選擇合適的固定和消化方法,重點(diǎn)關(guān)注消化過程中的時(shí)間、溫度差異和使用移液器反復(fù)吹打使殘余組織脫離是糖尿病小鼠視網(wǎng)膜脈管系統(tǒng)分離鋪片技術(shù)成功與否的關(guān)鍵。 

【文章來源】：中國中醫(yī)眼科雜志. 2020,30(04)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

不同消化方法組織形態(tài)圖（×400）。

圖1 不同消化方法組織形態(tài)圖（×400）。本實(shí)驗(yàn)采用STZ誘導(dǎo)的C57小鼠作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ�。一方面，STZ可直接造成胰島β細(xì)胞損傷，導(dǎo)致胰島素分泌不足而成功誘導(dǎo)糖尿病，重復(fù)性和成功率較高；另一方面，相對其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，小鼠與人類基因具有較高同源性，造模后可有效模擬DR的典型特點(diǎn)，同時(shí)具備成本低、體積小易操作的優(yōu)勢。故而本實(shí)驗(yàn)采用STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠進(jìn)行DR的相關(guān)研究。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]五味子乙素通過誘導(dǎo)血紅素加氧酶1表達(dá)改善糖尿病大鼠的視網(wǎng)膜病變[J]. 王開玲,周海艷.  中國中醫(yī)眼科雜志. 2020(01)
[2]固定時(shí)間不同的大鼠視網(wǎng)膜血管鋪片酶消化技術(shù)改進(jìn)研究[J]. 李玉明,王現(xiàn)軒,田蒙鴿,趙博厚,李永勝,劉建軻,蘇衍萍.  泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2018(11)
[3]大鼠視網(wǎng)膜毛細(xì)血管鋪片的制作技巧改進(jìn)[J]. 董學(xué)美,郭文輝,羅維蕓,許世清,蔡寒青.  中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué). 2016(05)
[4]糖尿病大鼠視網(wǎng)膜血管消化鋪片技術(shù)的改進(jìn)及技巧探討[J]. 何潔,韓靜,郝改梅,吳晏,王偉.  中國中醫(yī)眼科雜志. 2015(01)
[5]長時(shí)間甲醛固定的大鼠視網(wǎng)膜組織胰蛋白酶消化方法探討[J]. 李琳,李彥林,周云豐,王麗麗,李志強(qiáng),葛爭艷,郭宇潔,金龍,任燁,許揚(yáng).  中國藥理學(xué)通報(bào). 2014(12)
[6]糖基化終末產(chǎn)物誘導(dǎo)大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞表型和功能改變[J]. 許世清,姜永瑋,王慧,李鴻,婁晉寧,張文健.  中華糖尿病雜志. 2010(5)
[7]視網(wǎng)膜血管鋪片技術(shù)的改進(jìn)及在糖尿病視網(wǎng)膜病研究中的運(yùn)用[J]. 哈文靜,嚴(yán)宏,張偉,朱少君.  國際眼科雜志. 2005(06)



本文編號：3493490