背景:穿透支原體（M.penetrans,Mpe）是一種與艾滋病相關(guān)的支原體,因其能黏附并穿透真核細(xì)胞膜而得名�，F(xiàn)在發(fā)現(xiàn)Mpe除了與艾滋病相關(guān)外,還與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展也具有密切關(guān)系。人的免疫系統(tǒng)會(huì)產(chǎn)生大量的活性氧自由基（reactive oxygen species,ROS）來(lái)抵御病原菌的入侵。故Mpe在黏附感染并進(jìn)入到宿主的過(guò)程中不可避免會(huì)遇到大量的ROS,抗氧化能力的強(qiáng)弱對(duì)于Mpe在宿主體內(nèi)的存活及致病都極為重要。但迄今為止,Mpe的抗氧化機(jī)制仍不清楚。目的:本文構(gòu)建能夠表達(dá)穿透支原體Ferritin蛋白的原核表達(dá)質(zhì)粒p ET15b-Ferritin,誘導(dǎo)表達(dá)Ferritin蛋白并利用親和層析純化,檢測(cè)Ferritin蛋白的抗氧化活性,并測(cè)定它的免疫原性,為研究Ferritin蛋白在Mpe致病過(guò)程中的功能提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:1.利用生物信息學(xué)方法分析Mpe的Ferritin蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)等生物學(xué)特性。2.合成能夠在大腸桿菌中表達(dá)全長(zhǎng)Ferritin蛋白的編碼基因,根據(jù)Ferritin基因序列設(shè)計(jì)特異性PCR引物,PCR擴(kuò)增Ferritin基因。使用Nde I和Bam H ... 

【文章來(lái)源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

采用SignalP-4.1軟件預(yù)測(cè)Ferritin信號(hào)肽Figure1ThesignalpeptideofFerritinwaspredictedbyusingSignalP-4.1software

件預(yù)測(cè) Ferritin 蛋白定位在支原體細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，與通過(guò) SignalP4.1 預(yù)測(cè)它無(wú)信的結(jié)果相符合（圖 1）。圖 1 采用 SignalP-4.1 軟件預(yù)測(cè) Ferritin 信號(hào)肽Figure 1 The signal peptide of Ferritin was predicted by using SignalP-4.1 software利用 Clustal Omega 分析穿透支原體，解脲脲原體和衣阿華支原體 Ferritin的同源性，結(jié)果如圖 2 所示，發(fā)現(xiàn)這些蛋白之間的同源性并不是特別高，但活性位點(diǎn)特別保守（劃線部分為 Ferritin 蛋白的活性位點(diǎn)）。

圖 3 Ferritin 蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)Figure 3 The secondary structure of Ferritin利用 SWISS－MODEL 軟件模擬 Ferritin 三級(jí)結(jié)構(gòu)，得到的是一個(gè)同源 24聚體，由 24 個(gè)相同的 Ferritin 蛋白單體組成，其中間是一個(gè)用來(lái)存儲(chǔ)鐵元素的空腔（圖 4）。

【參考文獻(xiàn)】：
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