為闡明不同來源H7N9流感病毒誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素（IFN-Ⅰ）產(chǎn)生水平差異及其機制,本研究選取人源流感病毒A/Anhui/1/2013（AH/1）株和禽源流感病毒A/Pigeon/Shanghai/S1421/2013（PG/S1421）株作為模式病毒株,利用C57BL/6小鼠進行致病性試驗。結(jié)果顯示,AH/1株感染可以致小鼠發(fā)病死亡,而PG/S1421株則不會致小鼠發(fā)病。采用間接免疫熒光試驗和流式細(xì)胞試驗分別對兩株病毒在A549細(xì)胞和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中的感染效率進行檢測,結(jié)果顯示兩株病毒在兩種細(xì)胞中的感染效率無顯著差異。將該兩株病毒分別感染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,在感染后不同時間點收集培養(yǎng)上清,并裂解細(xì)胞收取細(xì)胞總蛋白。采用ELISA方法對細(xì)胞培養(yǎng)上清IFN-Ⅰ含量進行測定。結(jié)果顯示,感染后不同時間,AH/1株和PG/S1421株均可以誘導(dǎo)IFN-Ⅰ產(chǎn)生,但相較于PG/S1421株,AH/1株感染可以誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生更多的IFN-Ⅰ;利用western blot對細(xì)胞總蛋白中IFN-Ⅰ產(chǎn)生信號通路的上游感受器分子視黃酸誘導(dǎo)基因Ⅰ（RIG-Ⅰ）的表達水平進行檢測。結(jié)果顯示,在PG/S1421株感染細(xì)... 

【文章來源】：中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2020,42(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

PG/S1421株和AH/1株對小鼠的致病性試驗結(jié)果

分別通過IFA和流式細(xì)胞術(shù)檢測兩株流感病毒PG/S1421和AH/1對不同宿主細(xì)胞的感染效率，IFA實驗結(jié)果顯示兩株病毒感染A549細(xì)胞和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的熒光數(shù)量和強度無明顯差別（圖2A），流式結(jié)果顯示兩株病毒感染兩種細(xì)胞后的感染細(xì)胞數(shù)量無明顯差別（p=0.5026和p=0.6379）（圖2B），表明兩株病毒在A549細(xì)胞和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中的感染效率無差別。2.3 病毒感染細(xì)胞后IFN-β表達量的檢測結(jié)果

利用IFN-βELISA檢測試劑盒檢測兩株病毒感染后小鼠腹腔巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-β的蛋白含量。結(jié)果顯示，在感染后一定時間內(nèi)，兩株病毒均可以促進細(xì)胞中IFN-β表達，并且IFN的表達量隨時間的延長而增加（圖3），但是相較于PG/S1421,AH/1株能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生更多的IFN-β，結(jié)合2.2中結(jié)果，兩株H7N9病毒對宿主細(xì)胞的感染效率不存在顯著差異，表明IFN含量差異不是由于感染效率不同引起的。2.4 病毒感染細(xì)胞后胞內(nèi)RIG-I表達量的檢測結(jié)果

【參考文獻】：
期刊論文
[1]A型流感病毒逃避免疫應(yīng)答的策略[J]. 趙樸,鄭玉姝,喬傳玲,賈貝貝,劉興友.  生物化學(xué)與生物物理進展. 2008(10)



本文編號：3483850