目的:以胰腺組織裂解液定向誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化,形成胰島樣結(jié)構(gòu)并對(duì)其進(jìn)行評(píng)價(jià),探究分化過程中細(xì)胞形態(tài)變化的規(guī)律;探討胰島樣結(jié)構(gòu)的形態(tài)變化與內(nèi)分泌功能的關(guān)系。方法:采用胰腺組織裂解液,誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化為胰島樣結(jié)構(gòu);倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞、結(jié)構(gòu)的變化;以石蠟包埋切片并HE染色,觀察組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài);以雙硫腙染色對(duì)分化形成的細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行初步篩選;Mallory染色鑒別細(xì)胞及分布;使用免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)Insulin、C-peptide、Glucagon、和Somatostatin蛋白;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Pdx1、Ngn3、MaFA、Nkx6.1、Insulin、Glucagon、Somatostatin、GLUT-2基因的表達(dá);酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中Insulin和C-peptide,以評(píng)價(jià)胰島樣結(jié)構(gòu)的分泌功能。結(jié)果:1.誘導(dǎo)分化過程中,細(xì)胞形態(tài)變化規(guī)律。誘導(dǎo)早期,散在的細(xì)胞增多并聚集成細(xì)胞團(tuán);細(xì)胞團(tuán)收縮、細(xì)胞密度增加,逐漸形成有被膜包繞的結(jié)構(gòu)。2.胰島樣結(jié)構(gòu)內(nèi)可檢測(cè)到Insulin、C-peptide、Glucagon、Somatostatin陽性細(xì)胞... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

散在的細(xì)胞、簡(jiǎn)單聚集的細(xì)胞團(tuán)、收縮的細(xì)胞團(tuán)、膜包的細(xì)胞團(tuán)Insulin免疫熒光染色Fig.4-aInsulinimmunofluorescencestainingofscatteredcells,simpleaggregatedcellmass,contractedcellmass,andmembrane-packedcellmass.

43圖 4-b 散在的細(xì)胞、簡(jiǎn)單聚集的細(xì)胞團(tuán)、收縮的細(xì)胞團(tuán)、膜包的細(xì)胞團(tuán) C-peptide 免疫熒光染色Fig. 4-b C-peptide immunofluorescence staining of scattered cells, simple aggregated cell mass, contractedcell mass, and membrane-packed cell mass.

45圖 4-c 散在的細(xì)胞、簡(jiǎn)單聚集的細(xì)胞團(tuán)、收縮的細(xì)胞團(tuán)、膜包的細(xì)胞團(tuán) Glucagon 免疫熒光染色Fig. 4-c Glucagon immunofluorescence staining of scattered cells, simple aggregated cell mass, contractecell mass, and membrane-packed cell mass.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]PDX-1、NeuroD1及MafA轉(zhuǎn)導(dǎo)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及小鼠iPS細(xì)胞制備胰島素分泌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 范向軍.蘇州大學(xué) 2013
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碩士論文
[1]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞過程中GATA-4和a-MHC的表達(dá)[D]. 劉玲瓏.廣西醫(yī)科大學(xué) 2015
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