<正>目的為深入探索Rtn4-A/B基因的生物學(xué)功能,擬制備Rtn4-A/B基因敲除小鼠。方法采用RED/ET克隆方法,使用細(xì)菌人工染色體（BAC）載體構(gòu)建Rtn4-A/B基因打靶載體并使其線(xiàn)性化,通過(guò)電轉(zhuǎn)化法將其轉(zhuǎn)入129小鼠胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）。將正確同源重組的ES細(xì)胞注射入C57BL/6J小鼠囊胚腔,繁育出嵌合體小鼠后,進(jìn)一步繁殖以獲得雜合子小鼠。抽提小鼠尾尖組織DNA,采用PCR法鑒定小鼠的基因型。結(jié)果基因打靶后,得到15個(gè)發(fā)生雙臂正確同源重組ES細(xì)胞克隆。利用陽(yáng)性ES細(xì)胞克隆進(jìn)行囊胚內(nèi)顯微注射,得到5只嵌合率大于50%的雄鼠,最終繁育得到4只 

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