本文關鍵詞：瑞香素聯(lián)合DC疫苗抗小鼠移植性腫瘤H22效應的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察瑞香素聯(lián)合樹突狀細胞(DC)疫苗對小鼠H22肝癌移植瘤抗腫瘤免疫效應及其對荷瘤小鼠腫瘤細胞中抑凋亡基因Bcl-2及促凋亡基因Bax mRNA表達的影響,初步探討瑞香素聯(lián)合DC疫苗抗腫瘤的可能機制。方法:1、采用MTT法檢測不同濃度瑞香素對人肝癌HepG2細胞和小鼠肝癌H22體外增殖的抑制作用;2、體外培養(yǎng)DC并在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài),應用反復凍融法制備的腫瘤細胞全細胞抗原沖擊DC制備DC腫瘤疫苗;3、瑞香素聯(lián)合DC疫苗的體內抑瘤作用:建立小鼠H22肝癌荷瘤模型,將實驗動物隨機分為荷瘤對照組、5-Fu治療組、瑞香素組、DC疫苗組、瑞香素聯(lián)合DC疫苗組,另設健康對照組,每組8只,健康對照組和荷瘤對照組每鼠每天腹腔注射生理鹽水0.2mL,共14天;5-Fu組按20mg/kg·d劑量每鼠每天腹腔注射0.2mL,共14天;瑞香素組按4mg/kg·d劑量每鼠每天腹腔注射瑞香素0.2mL,共14天;DC疫苗組于接種腫瘤細胞后的第1d、7d在接種部位瘤周皮下注射DC疫苗(5×106/只);瑞香素聯(lián)合DC疫苗組:瑞香素按4mg/kg·d劑量每鼠每天腹腔注射瑞香素0.2mL,同時于接種腫瘤細胞后的第1d、7d在接種部位瘤周皮下注射DC疫苗(5×106/只)。第15天處死治療小鼠,計算抑瘤率、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù);4、檢測小鼠NK細胞活性以及ConA誘導的脾T淋巴細胞增殖指數(shù)(MTT法);5、HE染色,光鏡下觀察H22肝癌組織病理學改變;6、ELISA法檢測各組小鼠血清中細胞因子IFN-γ、ΙL-12、ΙL-4的水平;7、RT-qPCR法檢測各組小鼠腫瘤組織Bcl-2、Bax mRNA的表達。結果:1、①瑞香素濃度(μg/mL)為250、125、62.5、31.25、15.62、7.81、3.90、1.95、0.97、0.48時,作用hepg2細胞48h,其抑制率(%)分別為:63.71±2.20、62.69±0.76、61.68±1.80、59.09±1.08、56.40±1.33、47.92±1.65和28.02±2.23、20.05±1.60、16.60±1.53、10.10±1.71,ic50值(μg/ml)為21.89±0.70。②瑞香素濃度(μg/ml)為250、125、62.5、31.25、15.62、7.81、3.90、1.95、0.97、0.48時,作用于h22細胞48h,其抑制率(%)分別為:85.52±5.15、65.04±4.72、61.04±5.94、50.77±7.40、47.26±8.49、45.21±6.37、36.52±3.53、33.55±8.26、23.62±8.67、19.79±5.47,ic50值(μg/ml)為16.89±9.64。2、各用藥組對小鼠移植瘤生長均有抑制作用,以5-fu組最為明顯。荷瘤對照組、5-fu組、瑞香素組、dc疫苗組、瑞香素聯(lián)合dc疫苗組瘤質量(g)分別為1.817±0.388、0.424±0.309、0.833±0.314、1.206±0.523和0.493±0.306,均低于荷瘤對照組(p0.05)。三治療組間兩兩相比,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),聯(lián)合治療組與5-fu相比,差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。3、①瑞香素組、dc疫苗組、瑞香素聯(lián)合dc疫苗組脾臟指數(shù)分別是8.504±0.508、10.878±3.916和12.902±2.927,均高于荷瘤對照組7.075±0.379(p0.05)。聯(lián)合治療組高于與瑞香素組、dc疫苗組(p0.05),但瑞香素組與dc疫苗組間無差異(p0.05)。5-fu組脾臟指數(shù)為5.638±1.567,低于荷瘤對照組(p0.05)。②三治療組胸腺指數(shù)雖略高于荷瘤對照組,但差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。而5-fu組胸腺指數(shù)低于荷瘤對照組和健康對照組,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。4、瑞香素組、瑞香素聯(lián)合dc疫苗組nk細胞活性高于荷瘤對照組和5-fu組(p0.05),其中瑞香素聯(lián)合dc疫苗組的最高為(64.40±9.99)%,其次為瑞香素組(59.50±10.90)%。5-fu組則大大降低了脾淋巴細胞殺瘤活性,低于健康對照組和荷瘤對照組(p0.05)。5、瑞香素組、瑞香素聯(lián)合dc疫苗組cona誘導的t淋巴細胞增殖刺激指數(shù)高于荷瘤對照組和5-fu組(p0.05);5-fu組cona誘導的t淋巴細胞增殖刺激指數(shù),低于荷瘤對照組和健康對照組(p0.05)。6、各組腫瘤組織的病理學變化:he染色顯示,瑞香素聯(lián)合dc疫苗組可見大面積壞死區(qū),較多腫瘤細胞呈細胞核碎裂,核固縮等凋亡和壞死的形態(tài)學改變;荷瘤對照組壞死區(qū)較少,且壞死面積較小,腫瘤細胞生長旺盛,壞死及凋亡細胞較少;瑞香素組和dc疫苗組亦有明顯壞死,但壞死程度較瑞香素聯(lián)合dc疫苗組明顯減輕。7、治療組小鼠外周血細胞因子檢測:①三治療組血清IL-12含量均較荷瘤對照組高(P0.05),其中,瑞香素聯(lián)合DC疫苗組瑞香素組DC疫苗組(P0.05)。②三治療組血清IFN-γ含量均高于荷瘤對照組和5-Fu組,其中瑞香素聯(lián)合DC疫苗組高于瑞香素組和DC疫苗組(P0.05),但瑞香素組和DC疫苗組相比差異無顯著性(P0.05),瑞香素聯(lián)合DC疫苗組也高于健康對照組(P0.05)。③三治療組血清IL-4含量均低于荷瘤對照組(P0.05),其中瑞香素聯(lián)合DC疫苗組又低于瑞香素組和DC疫苗組(P0.05),瑞香素組和DC疫苗組相比,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。8、RT-qPCR實驗結果顯示,瑞香素組、DC疫苗組、瑞香素聯(lián)合DC疫苗組均能下調瘤組織中Bcl-2 mRNA的表達,同時能上調瘤組織中Bax mRNA的表達,與荷瘤對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);其中瑞香素聯(lián)合DC疫苗組瘤組織Bcl-2 mRNA與Bax mRNA比值最小。結論:1、瑞香素對HepG2細胞生長有不同程度的抑制作用,在0.48~250μg/mL濃度范圍內呈現(xiàn)良好的劑量依賴性;瑞香素對H22細胞生長也有抑制作用,在0.48~250μg/mL濃度范圍內亦呈現(xiàn)良好的劑量依賴性;2、瑞香素聯(lián)合DC疫苗能夠改善荷瘤小鼠的免疫功能狀態(tài),對小鼠H22移植瘤具有抑瘤作用,且效果好于單獨使用瑞香素或DC疫苗。
【關鍵詞】：瑞香素 DC疫苗 H22 免疫功能 Bcl-2 Bax 細胞因子
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R392-33
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-12
• 中英文縮略詞表12-13
• 第1章 前言13-16
• 第2章 材料與方法16-30
• 2.1 實驗材料16-18
• 2.1.1 腫瘤細胞株16
• 2.1.2 實驗動物16
• 2.1.3 試驗藥物16
• 2.1.4 主要試劑16-17
• 2.1.5 主要試劑配制17-18
• 2.1.6 主要儀器設備18
• 2.2 實驗方法18-29
• 2.2.1 MTT法檢測瑞香素對HepG2細胞增殖抑制18-20
• 2.2.2 MTT法檢測瑞香素對H22細胞增殖抑制20-21
• 2.2.3 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對H22荷瘤小鼠體內抑瘤作用及免疫功能影響21-24
• 2.2.4 HE染色法觀察腫瘤組織病理學變化24-25
• 2.2.5 ELISA法檢測各組小鼠外周血血清IFN25-27
• 2.2.6 RT-qPCR法檢測各組小鼠瘤組織中Bcl-2、Bax mRNA表達27-29
• 2.3 統(tǒng)計學分析29-30
• 第3章 結果30-45
• 3.1 瑞香素體外抑瘤作用30-31
• 3.1.1 瑞香素對HepG2細胞增殖抑制作用30
• 3.1.2 瑞香素對H22細胞增殖抑制作用30-31
• 3.2 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對H22荷瘤小鼠體內抑瘤作用及免疫功能影響31-37
• 3.2.1 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對H22荷瘤小鼠的體內抑瘤作用31-32
• 3.2.2 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對H22荷瘤小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響32-35
• 3.2.3 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對H22荷瘤小鼠NK細胞活性的影響35-36
• 3.2.4 ConA誘導的H22荷瘤小鼠T淋巴細胞增殖刺激指數(shù)36-37
• 3.2.5 HE染色法觀察腫瘤組織病理學變化37
• 3.3 各組小鼠外周血中細胞因子 IFN-γ、L-12、L-4 含量37-41
• 3.4 各組小鼠腫瘤組織中 Bcl-2、Bax m RNA 的表達41-45
• 3.4.1 實時熒光定量RT-qPCR的Bcl-2、Bax和 β-actin mRNA擴增產物的熔解曲線41-42
• 3.4.2 實時熒光定量RT-qPCR的Bcl-2、Bax和 β-actin mRNA的擴增曲線42
• 3.4.3 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對荷H22小鼠瘤組織中Bcl-2 和Bax mRNA表達的影響42-45
• 第4章 討論45-54
• 4.1 瑞香素體外抑瘤作用45-46
• 4.2 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對H22荷瘤小鼠的體內抑瘤作用及免疫功能影響46-49
• 4.2.1 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對荷H22瘤小鼠體內抑瘤作用46-47
• 4.2.2 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對荷H22小鼠免疫功能的影響47-49
• 4.3 瑞香素聯(lián)合 DC 疫苗對 H22 荷瘤小鼠外周血中細胞因子 IFN-γ、ΙL-12 和 IL-4 的影響49-51
• 4.4 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對H22荷瘤小鼠瘤組織中Bcl-2、Bax mRNA表達的影響51-54
• 第5章 結論與展望54-55
• 5.1 結論54
• 5.2 進一步研究探索的方向54-55
• 致謝55-56
• 參考文獻56-63
• 附圖63-67
• 綜述67-75
• 參考文獻72-75

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐麗;金清東;宮喜;劉卉;周瑞祥;;褪黑素的抗胃癌效應及其引起的Bcl-2、Bax、p21和p53的表達變化[J];生理學報;2014年06期

2 李鄭武;王瑩;王冰;朱紅杰;徐巖;袁淑杰;;腫瘤的生物學特征及其治療方法研究進展[J];科學中國人;2014年18期

3 陳丹丹;宋揚;代海華;;刺參酸性黏多糖對小鼠H22肝癌移植瘤Bcl-2和Bax基因表達影響[J];青島大學醫(yī)學院學報;2014年04期

4 林秀清;黃智銘;王劍虹;蔡勇;張豪;吳金明;吳建勝;;CD4~+CD25~+FoxP3~+調節(jié)性T細胞在小鼠H22原位肝癌模型中的表達和意義[J];醫(yī)學研究雜志;2013年10期

5 張志明;馮鐘煦;周敏;劉劍勇;趙蔭農;張春燕;唐凱;呂麗瓊;羅善超;;小鼠肝癌全細胞抗原致敏骨髓DC激活TIL抗癌機制的研究[J];中華腫瘤防治雜志;2013年13期

6 鄒文瑋;舒奇;傅穎媛;夏芝璐;;瑞香素毒理學實驗研究[J];中成藥;2013年05期

7 盧雯平;李向英;李曉;范秀華;;益氣活血解毒中藥聯(lián)合樹突狀細胞疫苗對荷瘤小鼠免疫抑制的調控[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2013年03期

8 歐陽欣;于挺敏;;瑞香素對大鼠前腦缺血后β-APP表達的影響[J];中華腦血管病雜志(電子版);2012年06期

9 馮鐘煦;劉劍勇;趙蔭農;張志明;張春燕;唐凱;呂麗瓊;羅善超;;H22細胞全細胞抗原負載的樹突狀細胞激活腫瘤浸潤性淋巴細胞抗小鼠肝癌的實驗[J];腫瘤防治研究;2012年10期

10 ;Neurotrophic effects of 7,8-dihydroxycoumarin in primary cultured rat cortical neurons[J];Neuroscience Bulletin;2012年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 許靜;陳杰;羅子玲;袁芳;;瑞香素體外抗炎機制的研究[A];廣東省藥學會2009學術年會論文集[C];2010年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 荊雪寧;黃芪多糖誘導樹突狀細胞成熟并促進特異性抗腫瘤免疫的實驗研究[D];山東中醫(yī)藥大學;2013年

2 滿玉紅;瑞香素對前腦缺血再灌注大鼠保護作用的實驗研究[D];吉林大學;2011年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 王冰;p53修飾的腫瘤抗原致敏制備DC瘤苗及其抗腫瘤效應[D];南昌大學;2014年

2 封芳;負載HBx抗原的DC疫苗在人免疫重建荷人肝癌裸鼠模型體內誘導的特異性抗肝癌效應的實驗研究[D];蘇州大學;2014年

3 陳小英;瑞香素聯(lián)合Bcl-2-siRNA和sFas-siRNA對CIA大鼠滑膜細胞抑調亡基因作用及分子機制[D];南昌大學醫(yī)學院;2013年

4 章志琴;瑞香素對CIA大鼠滑膜細胞促凋亡基因去甲基化作用及分子機制[D];南昌大學;2012年

5 劉艷;具有抗菌作用中藥單體的篩選及其聯(lián)合應用對耐藥菌BBF抑制作用的研究[D];長春中醫(yī)藥大學;2012年

6 鄒文瑋;瑞香素體外抗腫瘤及毒理學實驗研究[D];南昌大學;2010年

7 舒奇;瑞香素抗腫瘤及免疫調節(jié)作用研究[D];南昌大學;2009年

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本文編號：346407