發(fā)布時(shí)間：2017-05-05 13:10

  本文關(guān)鍵詞：瑞香素聯(lián)合DC疫苗抗小鼠移植性腫瘤H22效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察瑞香素聯(lián)合樹突狀細(xì)胞(DC)疫苗對(duì)小鼠H22肝癌移植瘤抗腫瘤免疫效應(yīng)及其對(duì)荷瘤小鼠腫瘤細(xì)胞中抑凋亡基因Bcl-2及促凋亡基因Bax mRNA表達(dá)的影響,初步探討瑞香素聯(lián)合DC疫苗抗腫瘤的可能機(jī)制。方法:1、采用MTT法檢測不同濃度瑞香素對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞和小鼠肝癌H22體外增殖的抑制作用;2、體外培養(yǎng)DC并在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),應(yīng)用反復(fù)凍融法制備的腫瘤細(xì)胞全細(xì)胞抗原沖擊DC制備DC腫瘤疫苗;3、瑞香素聯(lián)合DC疫苗的體內(nèi)抑瘤作用:建立小鼠H22肝癌荷瘤模型,將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為荷瘤對(duì)照組、5-Fu治療組、瑞香素組、DC疫苗組、瑞香素聯(lián)合DC疫苗組,另設(shè)健康對(duì)照組,每組8只,健康對(duì)照組和荷瘤對(duì)照組每鼠每天腹腔注射生理鹽水0.2mL,共14天;5-Fu組按20mg/kg·d劑量每鼠每天腹腔注射0.2mL,共14天;瑞香素組按4mg/kg·d劑量每鼠每天腹腔注射瑞香素0.2mL,共14天;DC疫苗組于接種腫瘤細(xì)胞后的第1d、7d在接種部位瘤周皮下注射DC疫苗(5×106/只);瑞香素聯(lián)合DC疫苗組:瑞香素按4mg/kg·d劑量每鼠每天腹腔注射瑞香素0.2mL,同時(shí)于接種腫瘤細(xì)胞后的第1d、7d在接種部位瘤周皮下注射DC疫苗(5×106/只)。第15天處死治療小鼠,計(jì)算抑瘤率、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù);4、檢測小鼠NK細(xì)胞活性以及ConA誘導(dǎo)的脾T淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)(MTT法);5、HE染色,光鏡下觀察H22肝癌組織病理學(xué)改變;6、ELISA法檢測各組小鼠血清中細(xì)胞因子IFN-γ、ΙL-12、ΙL-4的水平;7、RT-qPCR法檢測各組小鼠腫瘤組織Bcl-2、Bax mRNA的表達(dá)。結(jié)果:1、①瑞香素濃度(μg/mL)為250、125、62.5、31.25、15.62、7.81、3.90、1.95、0.97、0.48時(shí),作用hepg2細(xì)胞48h,其抑制率(%)分別為:63.71±2.20、62.69±0.76、61.68±1.80、59.09±1.08、56.40±1.33、47.92±1.65和28.02±2.23、20.05±1.60、16.60±1.53、10.10±1.71,ic50值(μg/ml)為21.89±0.70。②瑞香素濃度(μg/ml)為250、125、62.5、31.25、15.62、7.81、3.90、1.95、0.97、0.48時(shí),作用于h22細(xì)胞48h,其抑制率(%)分別為:85.52±5.15、65.04±4.72、61.04±5.94、50.77±7.40、47.26±8.49、45.21±6.37、36.52±3.53、33.55±8.26、23.62±8.67、19.79±5.47,ic50值(μg/ml)為16.89±9.64。2、各用藥組對(duì)小鼠移植瘤生長均有抑制作用,以5-fu組最為明顯。荷瘤對(duì)照組、5-fu組、瑞香素組、dc疫苗組、瑞香素聯(lián)合dc疫苗組瘤質(zhì)量(g)分別為1.817±0.388、0.424±0.309、0.833±0.314、1.206±0.523和0.493±0.306,均低于荷瘤對(duì)照組(p0.05)。三治療組間兩兩相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),聯(lián)合治療組與5-fu相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3、①瑞香素組、dc疫苗組、瑞香素聯(lián)合dc疫苗組脾臟指數(shù)分別是8.504±0.508、10.878±3.916和12.902±2.927,均高于荷瘤對(duì)照組7.075±0.379(p0.05)。聯(lián)合治療組高于與瑞香素組、dc疫苗組(p0.05),但瑞香素組與dc疫苗組間無差異(p0.05)。5-fu組脾臟指數(shù)為5.638±1.567,低于荷瘤對(duì)照組(p0.05)。②三治療組胸腺指數(shù)雖略高于荷瘤對(duì)照組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。而5-fu組胸腺指數(shù)低于荷瘤對(duì)照組和健康對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4、瑞香素組、瑞香素聯(lián)合dc疫苗組nk細(xì)胞活性高于荷瘤對(duì)照組和5-fu組(p0.05),其中瑞香素聯(lián)合dc疫苗組的最高為(64.40±9.99)%,其次為瑞香素組(59.50±10.90)%。5-fu組則大大降低了脾淋巴細(xì)胞殺瘤活性,低于健康對(duì)照組和荷瘤對(duì)照組(p0.05)。5、瑞香素組、瑞香素聯(lián)合dc疫苗組cona誘導(dǎo)的t淋巴細(xì)胞增殖刺激指數(shù)高于荷瘤對(duì)照組和5-fu組(p0.05);5-fu組cona誘導(dǎo)的t淋巴細(xì)胞增殖刺激指數(shù),低于荷瘤對(duì)照組和健康對(duì)照組(p0.05)。6、各組腫瘤組織的病理學(xué)變化:he染色顯示,瑞香素聯(lián)合dc疫苗組可見大面積壞死區(qū),較多腫瘤細(xì)胞呈細(xì)胞核碎裂,核固縮等凋亡和壞死的形態(tài)學(xué)改變;荷瘤對(duì)照組壞死區(qū)較少,且壞死面積較小,腫瘤細(xì)胞生長旺盛,壞死及凋亡細(xì)胞較少;瑞香素組和dc疫苗組亦有明顯壞死,但壞死程度較瑞香素聯(lián)合dc疫苗組明顯減輕。7、治療組小鼠外周血細(xì)胞因子檢測:①三治療組血清IL-12含量均較荷瘤對(duì)照組高(P0.05),其中,瑞香素聯(lián)合DC疫苗組瑞香素組DC疫苗組(P0.05)。②三治療組血清IFN-γ含量均高于荷瘤對(duì)照組和5-Fu組,其中瑞香素聯(lián)合DC疫苗組高于瑞香素組和DC疫苗組(P0.05),但瑞香素組和DC疫苗組相比差異無顯著性(P0.05),瑞香素聯(lián)合DC疫苗組也高于健康對(duì)照組(P0.05)。③三治療組血清IL-4含量均低于荷瘤對(duì)照組(P0.05),其中瑞香素聯(lián)合DC疫苗組又低于瑞香素組和DC疫苗組(P0.05),瑞香素組和DC疫苗組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。8、RT-qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,瑞香素組、DC疫苗組、瑞香素聯(lián)合DC疫苗組均能下調(diào)瘤組織中Bcl-2 mRNA的表達(dá),同時(shí)能上調(diào)瘤組織中Bax mRNA的表達(dá),與荷瘤對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);其中瑞香素聯(lián)合DC疫苗組瘤組織Bcl-2 mRNA與Bax mRNA比值最小。結(jié)論:1、瑞香素對(duì)HepG2細(xì)胞生長有不同程度的抑制作用,在0.48~250μg/mL濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的劑量依賴性;瑞香素對(duì)H22細(xì)胞生長也有抑制作用,在0.48~250μg/mL濃度范圍內(nèi)亦呈現(xiàn)良好的劑量依賴性;2、瑞香素聯(lián)合DC疫苗能夠改善荷瘤小鼠的免疫功能狀態(tài),對(duì)小鼠H22移植瘤具有抑瘤作用,且效果好于單獨(dú)使用瑞香素或DC疫苗。
【關(guān)鍵詞】：瑞香素 DC疫苗 H22 免疫功能 Bcl-2 Bax 細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392-33
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-12
• 中英文縮略詞表12-13
• 第1章 前言13-16
• 第2章 材料與方法16-30
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 2.1.1 腫瘤細(xì)胞株16
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物16
• 2.1.3 試驗(yàn)藥物16
• 2.1.4 主要試劑16-17
• 2.1.5 主要試劑配制17-18
• 2.1.6 主要儀器設(shè)備18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法18-29
• 2.2.1 MTT法檢測瑞香素對(duì)HepG2細(xì)胞增殖抑制18-20
• 2.2.2 MTT法檢測瑞香素對(duì)H22細(xì)胞增殖抑制20-21
• 2.2.3 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對(duì)H22荷瘤小鼠體內(nèi)抑瘤作用及免疫功能影響21-24
• 2.2.4 HE染色法觀察腫瘤組織病理學(xué)變化24-25
• 2.2.5 ELISA法檢測各組小鼠外周血血清IFN25-27
• 2.2.6 RT-qPCR法檢測各組小鼠瘤組織中Bcl-2、Bax mRNA表達(dá)27-29
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析29-30
• 第3章 結(jié)果30-45
• 3.1 瑞香素體外抑瘤作用30-31
• 3.1.1 瑞香素對(duì)HepG2細(xì)胞增殖抑制作用30
• 3.1.2 瑞香素對(duì)H22細(xì)胞增殖抑制作用30-31
• 3.2 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對(duì)H22荷瘤小鼠體內(nèi)抑瘤作用及免疫功能影響31-37
• 3.2.1 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對(duì)H22荷瘤小鼠的體內(nèi)抑瘤作用31-32
• 3.2.2 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對(duì)H22荷瘤小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響32-35
• 3.2.3 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對(duì)H22荷瘤小鼠NK細(xì)胞活性的影響35-36
• 3.2.4 ConA誘導(dǎo)的H22荷瘤小鼠T淋巴細(xì)胞增殖刺激指數(shù)36-37
• 3.2.5 HE染色法觀察腫瘤組織病理學(xué)變化37
• 3.3 各組小鼠外周血中細(xì)胞因子 IFN-γ、L-12、L-4 含量37-41
• 3.4 各組小鼠腫瘤組織中 Bcl-2、Bax m RNA 的表達(dá)41-45
• 3.4.1 實(shí)時(shí)熒光定量RT-qPCR的Bcl-2、Bax和 β-actin mRNA擴(kuò)增產(chǎn)物的熔解曲線41-42
• 3.4.2 實(shí)時(shí)熒光定量RT-qPCR的Bcl-2、Bax和 β-actin mRNA的擴(kuò)增曲線42
• 3.4.3 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對(duì)荷H22小鼠瘤組織中Bcl-2 和Bax mRNA表達(dá)的影響42-45
• 第4章 討論45-54
• 4.1 瑞香素體外抑瘤作用45-46
• 4.2 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對(duì)H22荷瘤小鼠的體內(nèi)抑瘤作用及免疫功能影響46-49
• 4.2.1 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對(duì)荷H22瘤小鼠體內(nèi)抑瘤作用46-47
• 4.2.2 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對(duì)荷H22小鼠免疫功能的影響47-49
• 4.3 瑞香素聯(lián)合 DC 疫苗對(duì) H22 荷瘤小鼠外周血中細(xì)胞因子 IFN-γ、ΙL-12 和 IL-4 的影響49-51
• 4.4 瑞香素聯(lián)合DC疫苗對(duì)H22荷瘤小鼠瘤組織中Bcl-2、Bax mRNA表達(dá)的影響51-54
• 第5章 結(jié)論與展望54-55
• 5.1 結(jié)論54
• 5.2 進(jìn)一步研究探索的方向54-55
• 致謝55-56
• 參考文獻(xiàn)56-63
• 附圖63-67
• 綜述67-75
• 參考文獻(xiàn)72-75

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：346407