目的構(gòu)建柯薩奇病毒A5（coxsackievirus A5, CV-A5）病毒樣顆粒（virus-like particles, VLPs）,并對(duì)其進(jìn)行純化和鑒定。方法①將CV-A5 P1和3CD基因序列根據(jù)昆蟲細(xì)胞密碼子偏好性,對(duì)CV-A5-3487R4/CHN XY/2017株基因進(jìn)行優(yōu)化并合成,然后分別克隆至供體質(zhì)粒pFastBacDual的多角體蛋白啟動(dòng)子（polyhedrin promotor, pPh）和pPl0啟動(dòng)子后,構(gòu)建pFastBacDual-Pl/3CD重組質(zhì)粒;②重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌（Escherichia coli,）DH10 Bac^TM中,轉(zhuǎn)座形成重組桿狀病毒質(zhì)粒（baculovirus plasmid, bacmid）;③再將重組bacmid轉(zhuǎn)染Sf9細(xì)胞,獲得重組桿狀病毒并表達(dá)CV-A5結(jié)構(gòu)蛋白、組裝VLPs。應(yīng)用限制性酶切、PCR擴(kuò)增、免疫熒光（immuno-fluorescence assay, IFA）技術(shù)對(duì)CV-A5 VLPs的蛋白進(jìn)行鑒定;④再利用蔗糖墊底離心和氯化銫（CsCl）密度梯度離心的方法純化CV-A5 VLPs... 

【文章來(lái)源】：微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2020,48(03)

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

純化rCV-A5VLs電鏡觀察

重組質(zhì)粒pFastBacDual-P1/3CD 分別經(jīng)EcoRⅠ/XbalⅠ和XhoⅠ/NheⅠ雙酶切后,瓊脂糖凝膠電泳的條帶分別在2 500 bp和1 900 bp左右,與合成的CV-A5 P1和CV-A5 3CD片段預(yù)期大小一致,見圖1。2.1.2 PCR鑒定

pFastBacDual-P1/3CD 重組Bacmid DNA鑒定圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3449950