中東呼吸綜合征冠狀病毒MERS-CoV （Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus）是一種新發(fā)的高致病性冠狀病毒,感染之后能夠引起嚴重的呼吸系統(tǒng)疾病,有時還伴有腎衰竭。截止到2015年6月6號,全球共確診了1190個病例,其中444例死亡,病死率接近40%。雖然目前還沒有確切的實驗室證據(jù)表明該病毒能夠在人際間傳播,但是動物檢測研究結(jié)果、流行病學(xué)研究和基因組分析提示該病毒有很大的可能性能夠在人際間傳播且存在大暴發(fā)的可能。目前尚無針對該病毒的疫苗和特異性抗病毒藥物,了解其致病和免疫保護或逃逸機制對于發(fā)現(xiàn)抗該病毒的藥物靶標(biāo)有著重要的理論意義。干擾素及其誘導(dǎo)的細胞抗病毒免疫反應(yīng)是宿主抵抗病毒入侵的第一道防線,在病毒感染早期發(fā)揮著非常重要的抗病毒作用,而病毒在其感染過程中也能夠通過其自身編碼的病毒蛋白抑制宿主的天然免疫反應(yīng)而發(fā)生天然免疫逃逸；細胞自噬是真核生物中廣泛存在的一種溶酶體依賴性的降解途徑,不同病毒可通過其編碼蛋白誘導(dǎo)或者抑制宿主細胞自噬的發(fā)生來發(fā)揮重要的抗病毒和促病毒作用。研究表明,MERS-CoV感染之后并不能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生強的Ⅰ/Ⅲ型干... 

【文章來源】：中國疾病預(yù)防控制中心北京市

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略詞
前言
    1. 病毒感染與天然免疫
        1.1 天然免疫概述
        1.2 TLRs及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
        1.3 RLRs及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
        1.4 NLRs及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
        1.5 病毒逃避天然免疫的機制研究進展
    2. 病毒感染與細胞自噬
        2.1 自噬概述
        2.2 自噬的研究方法
            2.2.1 觀察自噬體的形成
            2.2.2 自噬流的監(jiān)測
        2.3 病毒感染與自噬
            2.3.1 病毒感染抑制細胞自噬,促進自身復(fù)制
            2.3.2 病毒感染誘導(dǎo)細胞自噬,促進自身復(fù)制
    3. 自噬與天然免疫
    4、中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)
        4.1 MERS-CoV概述
        4.2 MERS-CoV與天然免疫
    5、研究目的及意義
材料方法
    1. 材料
        1.1 質(zhì)粒
        1.2 細胞系及病毒毒株
        1.3 抗體
        1.4 主要試劑
        1.5 主要儀器設(shè)備
        1.6 常用溶液
    2. 方法
        2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2 表達質(zhì)粒構(gòu)建
        2.3 SDS-PAGE以及Western-blot鑒定
        2.4 免疫熒光和激光共聚焦實驗
        2.5 雙熒光素酶報告基因檢測
        2.6 半定量RT-PCR(reverse transcription-PCR)
        2.7 免疫共沉淀
結(jié)果
    第一部分 MERS-CoV結(jié)構(gòu)蛋白和附屬蛋白的表達和亞細胞定位
        1.1 MERS-CoV結(jié)構(gòu)蛋白和附屬蛋白表達質(zhì)粒的構(gòu)建與表達驗證
        1.2 MERS-CoV結(jié)構(gòu)蛋白和附屬蛋白的亞細胞定位
        1.3 討論
        1.4 小結(jié)
    第二部分 MERS-CoV結(jié)構(gòu)蛋白和附屬蛋白拮抗干擾素功能的篩選及機制研究
        2.1 MERS-CoV結(jié)構(gòu)蛋白和附屬蛋白拮抗干擾素功能的篩選
            2.1.1 ORF4a,ORF4b,ORF5,以及M蛋白具有拮抗Ⅰ型干擾素的功能
            2.1.2 ORF4a,ORF4b,ORF5以及M蛋白能抑制IRF-3的功能,同時ORF4a還能抑制NF-κB的激活
            2.1.3 ORF4a,ORF 4b以及M蛋白能夠抑制干擾素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
            2.1.4 討論
            2.1.5 小結(jié)
        2.2 ORF4b抑制Ⅰ型干擾素的機制研究
            2.2.1 ORF 4b為核定位蛋白,能夠抑制Ⅰ型干擾素反應(yīng)
            2.2.2 ORF 4b與MDA5、IKKε、TBK1相互作用
            2.2.3 ORF4b能夠抑制過表達RIG-I,MDA5,MAVS,IKKε,TBK-1以及IRF-3誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素反應(yīng)
            2.2.4 缺失核定位信號后ORF4b不能夠抑制IRF3誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素反應(yīng)
            2.2.5 ORF4b不影響MDA5與MAVS的結(jié)合
            2.2.6 ORF4b能夠抑制IKKε/TBK1誘導(dǎo)的IRF3磷酸化和入核
            2.2.7 ORF4b不影響IKK-TBK1與其磷酸化底物IRF3/IRF7的結(jié)合
            2.2.8 ORF4b能夠抑制IKK8與MAVS的結(jié)合
            2.2.9 討論
            2.2.10 小結(jié)
    第三部分 MERS-CoV結(jié)構(gòu)蛋白和附屬蛋白誘導(dǎo)細胞自噬的功能研究
        3.1 MERS-CoV結(jié)構(gòu)蛋白E和M能夠誘導(dǎo)自噬體的聚集
        3.2 MERS-CoV結(jié)構(gòu)蛋白E和M能夠誘導(dǎo)不完全自噬
            3.2.1 E蛋白和M蛋白對自噬性底物p62表達水平無明顯影響
            3.2.2 LC3 turnover實驗
            3.2.3 mRFP-GFP-LC3呈遞實驗和GFP-LC3與LAMPl共定位實驗
        3.3 MERS-CoV結(jié)構(gòu)蛋白E和M能夠激活I(lǐng)RE1-XBP1通路
        3.4 MERS-CoV結(jié)構(gòu)蛋白E和M誘導(dǎo)的自噬不依賴mTOR/4E-BP1和mTOR/S6K通路
        3.5 討論
        3.6 小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻
發(fā)表綜述
    參考文獻
致謝
個人簡歷



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