蟹類等甲殼類水產(chǎn)品作為聯(lián)合國糧農(nóng)組織公布的八大類過敏食物之一,由其引起的食物過敏反應(yīng)通常伴隨終身,對過敏患者的生活造成嚴(yán)重影響。本文針對擬穴青蟹中（Scylla paramamosain）主要過敏原原肌球蛋白（tropomyosin,TM）和精氨酸激酶（arginine kinase,AK）的抗原表位進行深入研究,通過基因定點突變和適配體小肽技術(shù)降低TM和AK的致敏性,得到的低致敏性蛋白可望用于水產(chǎn)品過敏患者的免疫治療。本研究對TM和AK構(gòu)象表位中關(guān)鍵氨基酸和半胱氨酸進行基因定點突變,構(gòu)建重組表達載體pET-28a-mTM/mAK,在E.coli BL21（DE3）菌株中誘導(dǎo)表達得到TM的2種可溶性多突變體蛋白,分別命名為mTM1(TM/_{R90A-E164A-Y267A})和mTM2(TM/_{N132A-M171A-Y267A});AK的3種包涵體突變蛋白,分別命名為mAK1(AK/_C201A)、mAK2(AK/_K33A-T174A)和mAK3(AK/_T174A-C201A)。采用兔... 

【文章來源】：集美大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號表
第1章 引言
    1.1 食物過敏概況
    1.2 食物過敏原及其抗原表位
    1.3 甲殼類水產(chǎn)品主要過敏原
    1.4 食物過敏的免疫治療
    1.5 基因定點突變
    1.6 適配體小肽
    1.7 本研究的目的和意義
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株和載體
        2.1.2 動物
        2.1.3 血清
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
        2.1.5 主要試劑
        2.1.6 培養(yǎng)基及溶液配制
    2.2 方法
        2.2.1 TM和AK的基因定點突變與重組表達
        2.2.2 突變型過敏原的結(jié)構(gòu)及免疫結(jié)合活性分析
        2.2.3 突變型過敏原的樹突狀細胞吞噬模型分析
        2.2.4 突變型過敏原的BALB/c小鼠敏化模型分析
        2.2.5 TM和AK線性表位適配體小肽的篩選與鑒定
        2.2.6 統(tǒng)計分析
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 TM和AK的基因定點突變與重組表達
        3.1.1 TM和AK的基因定點突變
        3.1.2 mTM和mAK的表達及鑒定
    3.2 突變型TM和AK的結(jié)構(gòu)及免疫結(jié)合活性分析
        3.2.1 二級結(jié)構(gòu)分析
        3.2.2 表面疏水性分析
        3.2.3 免疫結(jié)合活性分析
    3.4 樹突狀細胞吞噬模型分析mTM和 mAK
    3.5 BALB/c小鼠敏化模型分析mTM和 mAK
        3.5.1 小鼠血清中特異性抗體水平檢測
        3.5.2 小鼠脾臟淋巴細胞中細胞因子水平檢測
        3.5.3 mTM和mAK對小鼠脾臟淋巴細胞分群的影響
    3.6 TM和AK線性表位適配體小肽的篩選與鑒定
        3.6.1 蛋白酶酶切位點預(yù)測
        3.6.2 反義小肽的設(shè)計
        3.6.3 TM和AK與反義小肽的分子對接
        3.6.4 適配體小肽對TM和AK免疫結(jié)合活性抑制作用的分析
第4章 討論
    4.1 突變型TM和AK的重組表達與性質(zhì)分析
    4.2 突變型TM和AK體內(nèi)外實驗分析
    4.3 TM和AK的線性表位適配體小肽分析
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻
附錄
在學(xué)期間科研成果情況


【參考文獻】：
期刊論文
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[4]舌下特異性免疫治療兒童過敏性哮喘的臨床效果觀察[J]. 覃美.  臨床醫(yī)藥文獻電子雜志. 2019(01)
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[10]特異性免疫不同方式給藥治療變應(yīng)性鼻炎的臨床效果觀察[J]. 趙廣輝,劉杰,宗國昶,馮小寶,魯珺,王苑.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展. 2018(12)

碩士論文
[1]擬穴青蟹過敏原精氨酸激酶的抗原表位分析研究[D]. 楊陽.集美大學(xué) 2015
[2]β-乳球蛋白致敏表位的適配體定位、酶解及脫敏研究[D]. 徐洪軍.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[3]擬穴青蟹精氨酸激酶的過敏性及其構(gòu)效關(guān)系的初步研究[D]. 毛海燕.集美大學(xué) 2013



本文編號：3445739