目的建立兩步離子交換層析純化方法以獲得濃縮的高純度HLA-A2二聚體。方法收集轉(zhuǎn)染有HLA-A2-IgG1 Fc重組基因的7A2D細胞上清,并進行ELISA和Western blot鑒定7A2D細胞表達的HLA-A2二聚體,檢測其濃度;應(yīng)用SPA親和層析和兩步法離子交換層析技術(shù)分別純化HLA-A2二聚體,并比較2種方法純化HLA-A2二聚體的效率。結(jié)果 7A2D細胞可表達正確構(gòu)象的HLA-A2二聚體,Western blot檢測顯示融合蛋白的分子量與預期大小一致,7A2D細胞上清中HLA-A2二聚體的濃度為4.4μg/mL。SPA親和層析法中pH3.0的洗脫條件使大部分的HLA-A2二聚體發(fā)生了變性反應(yīng),純化后構(gòu)象正確的HLA-A2二聚體純度為（10.4±1.3）%,回收率僅為（7.3±1.1）%;兩步離子交換層析后HLA-A2二聚體純度為（72.9±4.6）%、回收率為（51.9±6.5）%,均顯著高于SPA親和層析法。結(jié)論建立了一種純化條件相對溫和的兩步法離子交換層析純化方法,經(jīng)過該方法制備獲得的高純度與較高濃度的HLA-A2二聚體可保持正確的空間構(gòu)象,達到純化與濃縮的目的。 

【文章來源】：華中科技大學學報(醫(yī)學版). 2020,49(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要實驗材料
        1.1.1 實驗細胞
        1.1.2 實驗抗體
        1.1.3 主要試劑
    1.2 實驗方法
        1.2.1 7A2D細胞表達的HLA-A2二聚體的收集
        1.2.2 HLA-A2二聚體的ELISA鑒定
        1.2.3 HLA-A2二聚體的Western blot鑒定
        1.2.4 HLA-A2二聚體的濃度測定
        1.2.5 SPA親和層析法純化HLA-A2二聚體
        1.2.6 兩步法離子交換層析技術(shù)純化HLA-A2二聚體
        1.2.7 兩種純化方法的效率比較
    1.3 統(tǒng)計學分析
2 結(jié)果
    2.1 7A2D細胞可高效表達HLA-A2二聚體
    2.2 SPA親和層析純化方法容易導致HLA-A2二聚體變性
    2.3 兩步法離子交換層析技術(shù)可有效純化HLA-A2二聚體
    2.4 兩種純化方法的效率比較
3 討論



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