本文關(guān)鍵詞：NeuroD慢病毒載體構(gòu)建及在大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的過表達(dá)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景及目的:在哺乳動(dòng)物NeuroD在腦的發(fā)育中廣泛表達(dá)而且是中樞神經(jīng)系統(tǒng)形成所必須的,尤其是海馬和小腦的顆粒細(xì)胞產(chǎn)生過程中尤為重要。神經(jīng)祖細(xì)胞和放射狀膠質(zhì)細(xì)胞中都無NeuroD表達(dá),而在有絲分裂后期細(xì)胞可以檢測(cè)到其表達(dá),并在變性壞死后期神經(jīng)系統(tǒng)再生的新生細(xì)胞NeuroD的表達(dá)量有所增高。本研究即構(gòu)建NeuroD1慢病毒載體,觀察并驗(yàn)證NeuroD1對(duì)大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的表達(dá)活性。方法:利用SD大鼠新生鼠腦cDNA模板,設(shè)計(jì)合成NeuroD的cds區(qū)引物序列,用PCR擴(kuò)增出目的片段,凝膠回收純化和雙酶切,將NeuroD基因連接在慢病毒表達(dá)載體上,并與DH5a細(xì)菌同源重組,挑選陽性克隆,小提質(zhì)粒行基因測(cè)序鑒定,大抽質(zhì)粒后用Lipo2000轉(zhuǎn)染293細(xì)胞,包裝濃縮得到lv-NeuroD1和Lv-Green重組慢病毒;分離孕13-15 dSD大鼠胚胎腦NSCs,無血清培養(yǎng)基(DMEM/F12,含bFGF、EGF、B27等)條件下培養(yǎng),免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定神經(jīng)干細(xì)胞;慢病毒轉(zhuǎn)染SD胎鼠神經(jīng)干細(xì)胞,qPCR法檢測(cè)NeuroD1的表達(dá)情況。結(jié)果:在本實(shí)驗(yàn)中,經(jīng)檢測(cè)我們成功地構(gòu)建NeuroD1慢病毒表達(dá)載體;分離并鑒定了孕14-16天SD大鼠胎鼠腦NSCs,并在體外培養(yǎng)增殖;NeuroD1慢病毒轉(zhuǎn)染神經(jīng)干細(xì)胞后,能在神經(jīng)干細(xì)胞中過量表達(dá)。結(jié)論:成功構(gòu)建了大鼠腦源性NeuroD1慢病毒載體,成功轉(zhuǎn)染神經(jīng)干細(xì)胞,為進(jìn)一步研究NeuroD1在神經(jīng)干細(xì)胞分化中的信號(hào)通路和基因工程神經(jīng)干細(xì)胞治療研究奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：NeuroD 慢病毒 載體構(gòu)建 神經(jīng)干細(xì)胞 過表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R329.28
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-11
• 材料和方法11-30
• 1.實(shí)驗(yàn)材料12-15
• 1.1 菌種、細(xì)胞株和載體12-13
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑和設(shè)備13-14
• 1.3 實(shí)驗(yàn)試劑的配制14-15
• 2.實(shí)驗(yàn)方法15-30
• 2.1 NeuroD慢病毒載體的構(gòu)建15-21
• 2.2 慢病毒包裝21-24
• 2.3 神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)24-26
• 2.4 NeuroD慢病毒轉(zhuǎn)染神經(jīng)干細(xì)胞26-30
• 結(jié)果30-40
• 1.慢病毒質(zhì)粒構(gòu)建及包裝30-34
• 1.1 提取SD新生鼠腦總RNA30
• 1.2 PCR擴(kuò)增NeuroD目的基因30
• 1.3 雙酶切、菌落PCR驗(yàn)證重組質(zhì)粒和測(cè)序鑒定30-34
• 2.慢病毒包裝及滴度34-35
• 3.神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定結(jié)果35-40
• 討論40-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-51
• 綜述51-69
• 參考文獻(xiàn)58-69
• 致謝69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Differentiation of embryonic versus adult rat neural stem cells into dopaminergic neurons in vitro[J];Neural Regeneration Research;2008年08期

  本文關(guān)鍵詞：NeuroD慢病毒載體構(gòu)建及在大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的過表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：342482