目的建立一種靈敏、特異的一步法實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）,用于快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)柯薩奇病毒A組6型（CV-A6）。方法利用MEGA7.0軟件比對(duì)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中15條CV-A6VP1序列,選擇高保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針;以體外轉(zhuǎn)錄獲得的RNA為標(biāo)準(zhǔn)品,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),建立檢測(cè)CVA6病毒的RT-qPCR方法;對(duì)該方法的靈敏度、特異度、重復(fù)性進(jìn)行評(píng)估;并利用該方法對(duì)CV-A6病毒感染后的乳鼠組織進(jìn)行病毒載量的檢測(cè)。結(jié)果該方法在10²～10¹¹ copy/μL模板范圍內(nèi)出現(xiàn)良好的擴(kuò)增曲線(xiàn),檢測(cè)極限約為102 copy/μL,標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中R²系數(shù)為0.999,擴(kuò)增效率為109.6%;且該方法對(duì)腸道病毒71型（EVA71）、柯薩奇病毒A組16型（CV-A16）和柯薩奇病毒A組10型（CV-A10）均無(wú)交叉反應(yīng);另外,該方法在組間重復(fù)試驗(yàn)中,變異系數(shù)（CV）值小于2.0%。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)建立的方法具有較強(qiáng)的靈敏度、特異度和重復(fù)性,可用于CV-A6病毒的日常檢測(cè)、實(shí)驗(yàn)室診斷和定量分析。 

【文章來(lái)源】：國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志. 2020,41(11)

【文章頁(yè)數(shù)】：4 頁(yè)

【部分圖文】：

不同稀釋度的擴(kuò)增曲線(xiàn)

利用該方法檢測(cè)EV-A71、CV-A16、CV-A6和CV-A10病毒核酸時(shí)，僅有CV-A6出現(xiàn)陽(yáng)性擴(kuò)增曲線(xiàn)，其余病毒及NTC檢測(cè)結(jié)果均為陰性，見(jiàn)圖2。2.5 乳鼠組織病毒載量檢測(cè)結(jié)果

用該方法檢測(cè)YN-A13毒株感染1日齡BALB/c乳鼠后各組織中CV-A6的載量。其中，各樣本均出現(xiàn)良好的擴(kuò)增曲線(xiàn)見(jiàn)圖3A。Ct值在18.98～34.46，根據(jù)各樣本達(dá)到熒光閾值對(duì)應(yīng)的Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的公式可精確計(jì)算出各組織中CV-A6病毒的載量，見(jiàn)圖3B。3 討論

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]禽流感病毒實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立[J]. 王楷宬,王素春,朱琳,仲煥香,黃保續(xù).  中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2019(04)
[2]以主要流行EV71 VP1基因高度保守區(qū)為靶點(diǎn)的TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立[J]. 胡曉星,彭杰,馮悅,劉麗,張阿梅,夏雪山.  生命科學(xué)研究. 2016(03)
[3]柯薩奇病毒A6 TaqMan探針實(shí)時(shí)熒光逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)方法的建立[J]. 李洋,張相萍,翟明強(qiáng),黃學(xué)勇,李懿.  中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2015(11)
[4]柯薩奇病毒A組16型TaqMan一步法熒光定量RT-PCR快速檢測(cè)方法的建立[J]. 蔡麗娟,陳瑤,杜紅延,陳驪嘉,李明.  廣東醫(yī)學(xué). 2012(05)
[5]柯薩奇病毒B3的TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立[J]. 代海麗,高鐵磊,朱琳,曹威,欒穎,靳占峰.  中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志. 2012(01)



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