發(fā)布時(shí)間：2021-10-05 10:29

　　目的研究共培養(yǎng)狀態(tài)下樹突狀細(xì)胞（dendritic cell,DC）對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞（neural stem cell,NSC）存活的影響及其作用機(jī)制。方法體外分離、純化SD大鼠原代DC和NSC,將二者用Transwell技術(shù)共培養(yǎng),用NT-3特異性抗體中和NT-3的表達(dá);然后采用qRT-PCR方法檢測(cè)DC中神經(jīng)營養(yǎng)素-3（neurotrophin-3,NT-3）的mRNA水平,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)NSC凋亡;同時(shí)用免疫熒光、Western blot技術(shù)確定NSC表面NT-3特異性受體Trk C的表達(dá)。結(jié)果與DC單獨(dú)培養(yǎng)組相比,共培養(yǎng)體系中,DC表達(dá)NT-3水平顯著性增強(qiáng)（P<0.05）;同時(shí)共培養(yǎng)能顯著增加NSC存活,該效應(yīng)能被NT-3特異性中和性抗體阻斷;共培養(yǎng)能夠增加NSC中NT-3特異性受體TrkC表達(dá)（P<0.05）,并上調(diào)TrkC磷酸化水平,而NT-3特異性抗體能夠抑制TrkC表達(dá)和磷酸化上調(diào)（P<0.05）。結(jié)論 DC和NSC共培養(yǎng)能夠增加DC中NT-3表達(dá),高表達(dá)的NT-3則通過NSC膜上的TrkC受體促進(jìn)NSC的存活。 

【文章來源】：第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2013,35(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

激光共聚焦顯微鏡觀察共培養(yǎng)對(duì)NSC的TrkC表達(dá)的影響

-PCR結(jié)果顯示，與DC共培養(yǎng)能夠顯著增加NSC中TrkC的表達(dá)，即NSC/DC組NSC的TrkCmRNA水平(1．254±0.062)較NSC組(1．002±0．087)顯著增高(P＜0.05);NSC/DC+NT-3抗體組TrkCmRNA表達(dá)(0．607±0．102)低于NSC/DC組(P＜0.05)，顯示NT-3抗體能夠阻斷NSC/DC共培養(yǎng)TrkCmRNA的上調(diào)作用。Westernblot證實(shí)在蛋白水平具有同樣效應(yīng)［NSC/DC組、NSC組、NSC/DC+NT-3抗體組分別為(1．148±0．038)、(0．912±0．068)、(0．682±0．087)，圖2］。TrkC→GAPDH→←94×103←36×1031231:NSC/DC組;2:NSC組;3:NSC/DC+NT-3抗體組圖2Westernblot檢測(cè)各組NSC的TrkC蛋白的表達(dá)2．4與DC共培養(yǎng)促進(jìn)NSC中TrkC磷酸化Westernblot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)NSC/DC組p-TrkC水平(1．100±0.162)高于其余兩組［NSC組、NSC/DC+NT-3抗體組分別為(0．651±0．052)、(0．392±0．066)，P＜0.05］，且變化趨勢(shì)同TrkC相似(圖3)。p鄄TrkC→GAPDH→←220×103←36×1031231:NSC/DC組;2:NSC組;3:NSC/DC+NT-3抗體組圖3Westernblot檢測(cè)各組NSC的p-TrkC蛋白的表達(dá)3討論神經(jīng)干細(xì)胞具有促進(jìn)脊髓損傷修復(fù)的能力［12］，但是單獨(dú)移植神經(jīng)干細(xì)胞的存活和分化非常有限，主要原因在于局部的抑制性微環(huán)境不利于其存活和分化，故而目前多采用干細(xì)胞聯(lián)合神經(jīng)營養(yǎng)策略，如增加局部NT-3、BDNF［4］，或者聯(lián)合移植具有神經(jīng)營養(yǎng)作用的細(xì)胞［5］以改善局部微環(huán)境。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)DC和NSC共培養(yǎng)能夠增加DC中NT-3表達(dá)，并轉(zhuǎn)而上調(diào)NSC中NT-3特異性受體TrkC表達(dá)，促進(jìn)NSC存活;在共培養(yǎng)體系中使用NT-3特異性中和抗體能夠選擇性阻斷該效應(yīng)，并下調(diào)p-TrkC水平，表明該作用是通過NT-3/TrkC途徑而實(shí)現(xiàn)。現(xiàn)已證實(shí)，樹突狀細(xì)胞在受到外界抗原刺激時(shí)能增加包括NT-3、BDNF在內(nèi)的多種神經(jīng)?

(1．148±0．038)、(0．912±0．068)、(0．682±0．087)，圖2］。TrkC→GAPDH→←94×103←36×1031231:NSC/DC組;2:NSC組;3:NSC/DC+NT-3抗體組圖2Westernblot檢測(cè)各組NSC的TrkC蛋白的表達(dá)2．4與DC共培養(yǎng)促進(jìn)NSC中TrkC磷酸化Westernblot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)NSC/DC組p-TrkC水平(1．100±0.162)高于其余兩組［NSC組、NSC/DC+NT-3抗體組分別為(0．651±0．052)、(0．392±0．066)，P＜0.05］，且變化趨勢(shì)同TrkC相似(圖3)。p鄄TrkC→GAPDH→←220×103←36×1031231:NSC/DC組;2:NSC組;3:NSC/DC+NT-3抗體組圖3Westernblot檢測(cè)各組NSC的p-TrkC蛋白的表達(dá)3討論神經(jīng)干細(xì)胞具有促進(jìn)脊髓損傷修復(fù)的能力［12］，但是單獨(dú)移植神經(jīng)干細(xì)胞的存活和分化非常有限，主要原因在于局部的抑制性微環(huán)境不利于其存活和分化，故而目前多采用干細(xì)胞聯(lián)合神經(jīng)營養(yǎng)策略，如增加局部NT-3、BDNF［4］，或者聯(lián)合移植具有神經(jīng)營養(yǎng)作用的細(xì)胞［5］以改善局部微環(huán)境。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)DC和NSC共培養(yǎng)能夠增加DC中NT-3表達(dá)，并轉(zhuǎn)而上調(diào)NSC中NT-3特異性受體TrkC表達(dá)，促進(jìn)NSC存活;在共培養(yǎng)體系中使用NT-3特異性中和抗體能夠選擇性阻斷該效應(yīng)，并下調(diào)p-TrkC水平，表明該作用是通過NT-3/TrkC途徑而實(shí)現(xiàn)�，F(xiàn)已證實(shí)，樹突狀細(xì)胞在受到外界抗原刺激時(shí)能增加包括NT-3、BDNF在內(nèi)的多種神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達(dá)［9，13］，表明該體系中，神經(jīng)干細(xì)胞或相關(guān)因素可能作為抗原性物質(zhì)刺激樹突狀細(xì)胞而促進(jìn)其1190第35卷第12期2013年6月30日第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)JThirdMilMedUnivVol．35，No．12Jun．302013

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]體外樹突狀細(xì)胞通過NT-3上調(diào)P-ERK1/2的表達(dá)促進(jìn)神經(jīng)干/祖細(xì)胞分化[J]. 陳太邦,趙建華,王永飛,王鐘,郭喬楠.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(23)
[2]DCs和NSPCs共培養(yǎng)促進(jìn)NSPCs增殖及其機(jī)制的初步研究[J]. 王永飛,趙建華,晁瑞,陳太邦,郭喬楠.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(05)
[3]樹突細(xì)胞及神經(jīng)干細(xì)胞/前體細(xì)胞聯(lián)合移植促進(jìn)脊髓損傷大鼠運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)[J]. 晁瑞,趙建華,劉明永,王永飛,郭喬楠.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2011(10)



本文編號(hào)：3419556