發(fā)布時(shí)間：2021-09-28 13:08

　　鈣反應(yīng)性反式激活子（calcium-responsive transactivator,CREST）是神經(jīng)發(fā)育過程中分裂后神經(jīng)元內(nèi)高水平表達(dá)的一種核蛋白,通過調(diào)節(jié)鈣依賴性的基因轉(zhuǎn)錄影響神經(jīng)元樹突的發(fā)育,參與維持成熟神經(jīng)元的形態(tài)。缺乏CREST的基因敲除小鼠表現(xiàn)出明顯的運(yùn)動障礙、樹突生長異常和分支減少。我們實(shí)驗(yàn)室的前期研究發(fā)現(xiàn),無血清培養(yǎng)基誘導(dǎo)小鼠成神經(jīng)瘤母細(xì)胞（N2a細(xì)胞）分化過程中CREST表達(dá)增加,并呈顆粒狀分布于細(xì)胞質(zhì)中,過表達(dá)CREST可通過激活神經(jīng)元分化相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄,進(jìn)而促進(jìn)神經(jīng)突起的生長和神經(jīng)元的分化。神經(jīng)元分化建立在神經(jīng)突起（軸突、樹突）的生長和分支的基礎(chǔ)上。神經(jīng)突起內(nèi)部微管的組裝和延伸是神經(jīng)突起生長的骨架支撐,微管發(fā)育的缺陷會引起神經(jīng)系統(tǒng)形態(tài)和功能異常。神經(jīng)突起的形成和生長依賴于多種微管相互作用蛋白對微管骨架穩(wěn)定性和動態(tài)性的協(xié)同調(diào)節(jié),它們通過與微管骨架結(jié)合,調(diào)節(jié)微管的組裝、穩(wěn)定、解聚或斷裂。CREST在神經(jīng)元分化過程中出現(xiàn)的細(xì)胞質(zhì)顆粒狀分布現(xiàn)象提示其可能存在著胞質(zhì)功能,通過對微管骨架的直接影響調(diào)節(jié)神經(jīng)突起的生長。本研究利用免疫熒光和免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)分析了CREST與α-... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

CREST與α-tubulin及微管骨架的空間共定位關(guān)系

中 科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 確上述的共定位關(guān)系是否建立在 CREST 與 α-tubulin 蛋，我們通過 Co-IP 實(shí)驗(yàn)對出生后一周的小鼠大腦皮質(zhì)和a 細(xì)胞中二者的結(jié)合關(guān)系進(jìn)行了檢測。在大腦皮質(zhì)（圖 （圖 2 B）中，內(nèi)源性 CREST 與 α-tubulin 均存在相互作作用蛋白 CBP[39]和微管相關(guān)蛋白 Map2[40]作為陽性對照同種屬來源的 IgG作為陰性對照）。

24圖 4. 改變 CREST 表達(dá)水平對微管穩(wěn)定性影響分析。A，含 5% FBS 培養(yǎng)的 N2a 細(xì)胞、無血清培養(yǎng)誘導(dǎo)分化的 N2a 細(xì)胞、轉(zhuǎn)染 CREST 質(zhì)粒和對照質(zhì)粒的 N2a 細(xì)胞培養(yǎng) 48 h 后，免疫熒光顯示微管蛋白的空間分布和組裝情況。比例尺=10 μm（方框內(nèi)放大圖比例尺=5μm）；B，5% FBS 培養(yǎng)的 N2a 細(xì)胞和無血清培養(yǎng)誘導(dǎo)分化的 N2a 細(xì)胞、轉(zhuǎn)染 pCMV-HA-CREST 質(zhì)粒和對照質(zhì)粒的 N2a 細(xì)胞、無血清培養(yǎng)誘導(dǎo)分化條件下轉(zhuǎn)染 CREST-SiRNA 和對照 RNA 的 N2a 細(xì)胞，培養(yǎng) 48 h 后，Western blot 檢測 CREST、α-tubulin、Acetyl-α-tubulin、Detyr-α-tubulin 的表達(dá)水平；C、D，圖 B 中 α-tubulin 乙酰化和去酪氨酸修飾水平變化的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，*表示與對照組[FBS(+)]比較，0.01<P<0.05（n=3）；**表示與對照組[FBS(+)]比較，0.001<P<0.01（n=3）；#表示與對照組[FBS(+)+ Vector]比較，0.01<P<0.05

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]無血清培養(yǎng)上調(diào)N2a細(xì)胞鈣反應(yīng)性反式激活因子的表達(dá)[J]. 王巧真,金真真,彭挺,管英俊,李和.  中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志. 2012(05)
[2]Effect of amyloid peptides on serum withdrawal-induced cell differentiation and cell viability[J]. Yi Peng WANG, Ze Fen WANG, Ying Chun ZHANG, Qing TIAN, Jian Zhi WANG Department of Pathophysiology, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan, 430030, China.  Cell Research. 2004(06)

博士論文
[1]鈣反應(yīng)性反式激活子CREST通過p300調(diào)節(jié)p53乙�；龠M(jìn)神經(jīng)細(xì)胞分化[D]. 曹麗穎.華中科技大學(xué) 2018



本文編號：3411959