發(fā)布時間：2021-08-28 16:08

　　目的研究缺氧對大鼠肺成纖維細(xì)胞甲酰肽受體1（formyl peptide receptor 1, FPR1）表達(dá)的影響。方法分離大鼠肺成纖維細(xì)胞,用48孔Boyden趨化小室觀察大鼠成纖維細(xì)胞在不同濃度（0、10、100、1 000 nmol/L組）的FPR激動劑（fMLF）作用下的趨化能力。將細(xì)胞置于低氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（1%O₂,5%CO₂,94%N₂,37℃）24 h,取細(xì)胞培養(yǎng)上清,結(jié)合FPR特異性拮抗劑tBoc處理,檢測缺氧培養(yǎng)上清中FPR介導(dǎo)的趨化活性。將細(xì)胞分為常氧組[普通培養(yǎng)箱（5%CO₂,95%空氣,37℃）]和缺氧組[置低氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（1%O₂,5%CO₂,94%N₂,37℃）2、12、24 h],用免疫印跡、PCR檢測大鼠肺成纖維細(xì)胞FPR1和FPR激活物膜聯(lián)蛋白A1（annexin A1, AnxA1）的蛋白、mRNA水平。不同濃度fMLF作用下細(xì)胞中FPR1、AnxA1的蛋白水平。使用tBoc預(yù)處理細(xì)胞并缺氧2... 

【文章來源】：第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2020,42(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

Western blot檢測fMLF處理后細(xì)胞FPR1、AnxA1的蛋白表達(dá)水平

Western blot檢測缺氧和FPR拮抗劑對細(xì)胞FPR1、AnxA1的蛋白表達(dá)水平的影響

Western blot結(jié)果顯示(圖3),大鼠肺成纖維細(xì)胞表達(dá)FPR1,在1%的缺氧條件下缺氧12 h后FPR1的蛋白表達(dá)與缺氧0 h組相比顯著增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);缺氧2、24 h組與缺氧0 h組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。缺氧12、24 h與缺氧0 h組相,AnxA1的蛋白表達(dá)顯著增加,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);缺氧2 h與缺氧0 h組相比,雖然蛋白表達(dá)增加,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。PCR結(jié)果顯示(圖3),肺成纖維細(xì)胞缺氧2、12、24 h的FPR1、AnxA1的電泳條帶與缺氧0 h組相比顯著加深,而內(nèi)參β-actin的變化不明顯,通過灰度分析發(fā)現(xiàn)(圖3),缺氧 2、12、24 h組FPR1、AnxA1的mRNA水平均較缺氧0 h 組顯著增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。圖2 細(xì)胞趨化實驗檢測大鼠肺成纖維細(xì)胞FPR的趨化活性

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]敲低Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3（RUNX3）抑制低氧誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化[J]. 劉艷華,李賓公,王裕勤,王得龍,鄒晉,柯旋,郝艷琴.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2016(12)



本文編號：3368830