本文關(guān)鍵詞：誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向角膜上皮樣細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,hUCMSCs)向角膜上皮樣細(xì)胞分化的可行性研究。方法1.IV型膠原酶消化法分離培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUCMSCs),對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。并通過(guò)細(xì)胞表型和多潛能誘導(dǎo)分化鑒定hUC-MSCs。2.分別采用胰酶消化法和組織塊貼壁法獲取兔角膜上皮細(xì)胞(corneal epithelial cells RECEs),倒置顯微鏡觀察其形態(tài)和生長(zhǎng)狀態(tài),CCK8法測(cè)定RECEs的增殖活性,免疫熒光檢測(cè)其角膜上皮細(xì)胞特異性角蛋白CK3+12的表達(dá)。3.將臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與兔角膜上皮細(xì)胞通過(guò)Transwell體系進(jìn)行隔離共培養(yǎng)7天,誘導(dǎo)過(guò)程中倒置顯微鏡和原子力顯微鏡對(duì)比觀察hUC-MSCs形貌的改變;qRT-PCR檢測(cè)誘導(dǎo)前后人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞CK3mRNA,PAX6mRNA表達(dá)量的變化;免疫熒光檢測(cè)角蛋白抗體CK3+12,CK14,CK19,PNCA的表達(dá)。設(shè)定共培養(yǎng)組為實(shí)驗(yàn)組,常規(guī)培養(yǎng)hUC-MSCs為對(duì)照組。結(jié)果HUCMSCs形態(tài)比較均一,呈典型的梭形和成纖維形;hUCMSCs高表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞表型CD13、CD29、CD73、CD90,不表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞和造血細(xì)胞表型CD14、CD31、CD45、HLA-DR;特定的條件培養(yǎng)液下,hUC-MSCs成功向成骨成脂定向分化。RECEs呈類(lèi)圓形、多邊形;增殖快,融合后呈鋪路石樣外觀;CCK8法測(cè)定RECEs的生長(zhǎng)曲線呈S形;免疫組化檢測(cè)RECEs表達(dá)角膜上皮細(xì)胞特異性角蛋白CK3+12。HUC-MSCs與RECEs共培養(yǎng)誘導(dǎo)七天后,倒置顯微鏡下體積變大,核漿比變小;原子力顯微鏡下觀察hUC-MSCs胞體寬大,胞膜表面立體感減弱;CK3mRNA和PAX6mRNA表達(dá)量均比誘導(dǎo)前顯著增加(P0.05);免疫熒光檢測(cè)CK3+12,CK14,CK19,PCNA表達(dá)陽(yáng)性。結(jié)論在Transwell共培養(yǎng)體系下,人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞可以向角膜上皮樣細(xì)胞分化。
【關(guān)鍵詞】：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 兔角膜上皮細(xì)胞 共培養(yǎng) 誘導(dǎo)
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R329
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 前言7-14
• 參考文獻(xiàn)11-14
• 第一部分：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定14-25
• 引言14
• 材料與方法14-19
• 結(jié)果19-21
• 討論21-23
• 參考文獻(xiàn)23-25
• 第二部分：兔角膜上皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定25-33
• 引言25
• 材料與方法25-28
• 結(jié)果28-30
• 討論30-32
• 參考文獻(xiàn)32-33
• 第三部分 誘導(dǎo)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向角膜上皮樣細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究33-45
• 引言33
• 材料與方法33-38
• 結(jié)果38-41
• 討論41-43
• 參考文獻(xiàn)43-45
• 全文總結(jié)45-46
• 不足和展望46-47
• 英文縮略詞表47-48
• 在校期間發(fā)表的論文及科研成果48-49
• 致謝49

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 李華;文峰;漆仲春;周進(jìn)軍;朱亞杰;程朋;魏東;蘇曉妹;譚勇;彭晶晶;羅巧麗;李東;張濤;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與肝細(xì)胞共培養(yǎng)可分化為肝樣細(xì)胞[J];中國(guó)組織工程研究;2013年32期

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3 任玫卿;欒潔;;兔角膜上皮細(xì)胞體外原代培養(yǎng)方法的研究[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年02期

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  本文關(guān)鍵詞：誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向角膜上皮樣細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：336400