目的本文研究EBI3蛋白與Sedlin蛋白間的相互作用,利用GST Pull-down和免疫共沉淀等方法探究了EBI3蛋白以及其截短體與Sedlin蛋白在體外和哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的的相互作用情況。同時(shí)研究Sedlin和EBI3在分泌過程中的相互影響。方法制備GST-Sedlin融合蛋白,并將含有FLAG標(biāo)簽的EBI3、EBI3（1-135）和EBI3（125-230）的質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至HEK 293T細(xì)胞中,利用GST Pull-down探究EBI3蛋白和其截短體EBI3（1-135）、EBI3（125-230）與Sedlin蛋白在體外相互作用以及EBI3糖基化對相互作用的影響。將含有FLAG標(biāo)簽的EBI3及其截短體EBI3（1-135）、EBI3（125-230）的質(zhì)粒分別和含有GFP標(biāo)簽以及HA標(biāo)簽的Sedlin等質(zhì)粒共同瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至至HEK 293T細(xì)胞,用免疫共沉技術(shù)探究EBI3及其截短體EBI3（1-135）、EBI3（125-230）蛋白和Sedlin蛋白在細(xì)胞內(nèi)的相互作用情況。將含有FLAG標(biāo)簽的EBI3和含有HA標(biāo)簽的Sedlin的質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至COS7細(xì)胞中,在細(xì)胞培養(yǎng)基上清... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

LPS刺激巨噬細(xì)胞后的培養(yǎng)基上清中EBI3蛋白的檢測

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士畢業(yè)論文TCAGATGACGTTTTT，Sedlin-sh1-R: AATTAAAAACGTCATCTGACATACTCGAGTATGAACTGGTTCAGATGACG; Sedlin-sh2-F：GATAATCCAAAGACGACCATCTCGAGATGGTCGTCTTTGGATTCTGClin-sh2-R: AATT AAAAA GCAGAATCCA AAGACGACCA TCTCGAGTCTTTGGATTCTGC)用慢病毒包裝后，以不同的 MOI 感染 THP-1 rene 5 μg/ml)，感染 24 h 后換液，繼續(xù)培養(yǎng)至足夠細(xì)胞量后用 1 μg/m篩選，篩選 48 h 后換液收細(xì)胞 Western blot 檢測。結(jié)果表明感染后A3-Sedlin MOI=10 組的 Sedlin 被明顯敲低，將對應(yīng)的細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)并 Sedlin 蛋白的 THP-1 細(xì)胞株。


本文編號：3360007