發(fā)布時(shí)間：2021-08-24 10:00

　　目的:制備靶向H7N9神經(jīng)氨酸酶（Neuraminidase,NA）的嵌合抗體,對其功能特性進(jìn)行初步鑒定,為H7N9的預(yù)防控制提供理論依據(jù)。方法:根據(jù)鼠源抗N9 MAb原始信息,挑選8株特異性靶向流感病毒A/Anhui/1/2013（H7N9）NA的雜交瘤細(xì)胞株,使用基因工程技術(shù)對其進(jìn)行人源化改造并獲得嵌合抗體,通過ELISA,BLI,FACS,HI,NI,微量中和實(shí)驗(yàn),ADCC,空斑實(shí)驗(yàn)及競爭ELISA一系列實(shí)驗(yàn)技術(shù)對獲得嵌合抗體活性及功能進(jìn)行鑒定。結(jié)果:獲得了三株特異性抗H7N9亞型流感病毒N9嵌合抗體1E2,3E3及5D1,對AH-N9蛋白的EC50值分別為0.048μg/ml,0.028μg/ml和0.675μg/ml;其中1E2和3E3對AH-N9蛋白具有極強(qiáng)的親和力,KD值達(dá)p M;1E2和3E3具有相似的抗原結(jié)合部位并與5D1的抗原識別表位不同;三株嵌合抗體都能不同程度抑制NA酶活及耐藥N9神經(jīng)氨酸酶活,其中3E3 NA酶活抑制能力最強(qiáng),體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中只有1E2和3E3兩株嵌合抗體可以抑制病毒釋放,阻止病毒進(jìn)一步感染細(xì)胞,其中3E3對病毒的抑制性最強(qiáng)。結(jié)論:本研究構(gòu)建的三... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

抗體輕鏈基因2ndPCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖,從左至右分別為3C1，3E3，5D1，

圖 3.2 抗體重鏈基因 2nd PCR 產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖,從左至右分別為 3C1，3E3，5D1，2A8，Marker，1E2，1G8，3B9，5D5，Marker表 3.1 嵌合抗體的重鏈基因信息雜交瘤細(xì)胞株克隆編號質(zhì)粒編號 VH 片段V 片段變異度(%)DH 片段 JH 片段JH 片段變異度(%)CDR殘基數(shù)3C1 3C1 - VH1MusmusIGHV1S34*01 F 5 -MusmusIGHJ4*01 F 7.41 8.8.X3E3 3E3 - VH1MusmusIGHV1S34*01 F 4.46 -MusmusIGHJ2*01 F 4.17 8.8.105D15D1 - VH1MusmusIGHV1-18*01 F 7.64MusmusIGHD2-1*01 FMusmusIGHJ4*01 F 1.85 8.8.145D1 - VH2MusmusIGHV1S135*01[F] 8.33MusmusIGHD4-1*01 FMusmusIGHJ2*01 F 0 8.8.145D1 - VH3MusmusIGHV1-14*01 F 3.12MusmusIGHD4-1*01 FMusmusIGHJ4*01 F 4.7 8.8.142A8 2A8 - VH3MusmusMusmusMusmus

我們可以看出三株嵌合抗體均不能抑制病毒釋放并減小空斑直徑大小。（5）我們通過12孔板空斑實(shí)驗(yàn)，判斷三株嵌合抗體與感染RG267-H7N9后的MDCK細(xì)胞共同孵育后是否能夠減少斑塊數(shù)量。從圖3.6-A，B我們可以得出在高3.7 微量中和實(shí)驗(yàn)結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2017-2018年河南省流感病毒對神經(jīng)氨酸酶抑制劑藥物的耐藥性研究[J]. 趙升,僧明華,呂宛玉,楊建輝,張新,徐瑾.  中華疾病控制雜志. 2019(03)
[2]人用H7N9禽流感滅活疫苗免疫效果評價(jià)的Meta分析[J]. 伍小雪,茍曉琴,石渝,張柯,錢媛,蘇敏,黃俊瓊.  預(yù)防醫(yī)學(xué). 2019(03)
[3]人感染H7N9禽流感流行病學(xué)與預(yù)防控制研究進(jìn)展[J]. 劉麗麗.  中國社區(qū)醫(yī)師. 2019(01)
[4]人用H7N9禽流感病毒疫苗臨床研究進(jìn)展及預(yù)防控制[J]. 伍小雪,黃俊瓊.  齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2018(23)
[5]H7N9禽流感病毒及其高致病性的研究進(jìn)展[J]. 茍曉琴,黃俊瓊.  海南醫(yī)學(xué). 2018(23)
[6]H7N9流感病毒研究進(jìn)展及防控措施[J]. 任雪楓,祝培波.  當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè). 2018(12)
[7]廣東省佛山市活禽交易市場中不同休市時(shí)間對環(huán)境中H7亞型禽流感病毒污染水平的影響[J]. 楊澤鋒,梁自勉,黃嘉殷,張敏.  醫(yī)學(xué)動物防制. 2018(12)
[8]廣州市禽類交易區(qū)休市前后禽流感病毒動態(tài)監(jiān)測[J]. 曹藍(lán),劉艷慧,陳藝韻,馬鈺,夏丹,李魁彪,陸劍云,狄飚,魯恩潔.  中華疾病控制雜志. 2018(06)
[9]廣東省廣州市活禽批發(fā)市場從業(yè)人員H7N9流感“知信行”現(xiàn)狀調(diào)查[J]. 陳裕華,沈丹,朱建翠,于飛,黃森,王令,張海明,何日文.  中國動物檢疫. 2018(02)
[10]深圳市禽職業(yè)暴露人群感染H7N9禽流感病毒血清學(xué)調(diào)查[J]. 王昕,房師松,劉慧,武偉華,彭博,耿藝介,唐秀娟.  職業(yè)與健康. 2018(03)

博士論文
[1]新型流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑的設(shè)計(jì)、合成與初步活性研究[D]. 劉瑜.山東大學(xué) 2011

碩士論文
[1]來源于H5N1禽流感患者的廣譜抗血凝素蛋白抗體篩選及其功能研究[D]. 孫穎.中國疾病預(yù)防控制中心 2018
[2]H7N9亞型禽流感病毒血凝素特異性單克隆抗體的制備及鑒定[D]. 程道承.揚(yáng)州大學(xué) 2018
[3]H7N9流感病毒神經(jīng)氨酸酶特異性單克隆抗體的制備及其應(yīng)用研究[D]. 于悅洋.中國疾病預(yù)防控制中心 2017
[4]不同頻次消毒對活禽市場禽流感病毒的影響[D]. 谷苗苗.南昌大學(xué) 2017
[5]H7亞型禽流感病毒HA蛋白及N1、N9亞型NA蛋白單克隆抗體的制備[D]. 陳思.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2017
[6]20例H7N9禽流感患者的臨床特點(diǎn)及預(yù)后分析[D]. 萬道謀.南昌大學(xué) 2017
[7]神經(jīng)氨酸酶抑制劑的抗流感活性研究[D]. 曾雄飛.天津科技大學(xué) 2016
[8]針對禽流感N5、N8、N9三種神經(jīng)氨酸酶NA蛋白單克隆抗體及N5膠體金試紙條的研制[D]. 尹穎.揚(yáng)州大學(xué) 2016
[9]人群血清中抗流感病毒中國流行株抗體水平研究[D]. 郭琦.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2015



本文編號：3359776