[目的]α-Gal抗原是動(dòng)物組織、器官引起超急性免疫排斥反應(yīng)的主要靶抗原,動(dòng)物源性生物材料經(jīng)脫抗原工藝處理后仍然殘留α-Gal抗原。本研究旨在建立動(dòng)物源性生物材料α-Gal抗原特異性的免疫原性檢測(cè)與評(píng)價(jià)技術(shù)。[方法]1、動(dòng)物源性生物材料Gal抗原含量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化方法的建立與應(yīng)用采用人工合成的Gal-BSA結(jié)合Gal抗原陰性生物材料裂解上清液作為標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,以Gal抗原陽(yáng)性生物材料（豬肝臟來(lái)源）與Gal抗原陰性生物材料（人胎盤(pán)組織來(lái)源）監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)體系的敏感性和特異性,利用Gal抗原特異性抗體（M86）,建立酶聯(lián)免疫抑制方法。采用建立的標(biāo)準(zhǔn)方法定量檢測(cè)脫細(xì)胞基質(zhì)類生物材料（如牛源生物骨修復(fù)材料、牛心包來(lái)源組織修復(fù)補(bǔ)片、脫細(xì)胞豬結(jié)膜）的Gal抗原殘留量;同時(shí)考察以豬肝臟為原料制備的Gal抗原陽(yáng)性生物材料參考品的均一性及穩(wěn)定性;以協(xié)作標(biāo)定的方式對(duì)Gal抗原陽(yáng)性生物材料參考品的Gal抗原含量進(jìn)行賦值。2、GGTA1基因敲除小鼠的制備、免疫學(xué)特性及應(yīng)用研究利用細(xì)菌染色體同源重組技術(shù)制備GGTA1基因敲除（KO）小鼠。采用southern bolt鑒定小鼠基因型的變化。取GGTA1 KO小鼠的主要臟器... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：115 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１標(biāo)準(zhǔn)品Ｇａｌ－ＢＳＡ的Ｍ８６結(jié)合抑制曲線

總ＩｇＧ、ＩｇＭ檢測(cè)??ＩｇＧ：根據(jù)小鼠ＩｇＧ檢測(cè)試劑盒操作，血清稀釋選擇５０萬(wàn)ＩｇＭ：根據(jù)小鼠ＩｇＭ檢測(cè)試劑盒操作，血清稀釋選擇１５萬(wàn)Ｇａ丨ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ檢測(cè)??制小鼠血清系列稀釋液，稀釋比例為１：２５，１：１００，?１：４００，６００，１：５１２００，具體實(shí)驗(yàn)方法見(jiàn)第二部分。??析???２０．０軟件，所得計(jì)量數(shù)據(jù)以（ｉ±Ｓ）表示，多組間行單因異有顯著性意義。??Ｂｌｏｔ??Ｈ＊?Ｈ??

圖２?ＷＴ小鼠與ＧＧＴＡｌ?ＫＯ小鼠的ｍＲＮＡ表達(dá)水平??比，ＧＧＴＡ１?ＫＯ小鼠的ＧＧＴＡ１?ｍＲＮＡ未見(jiàn)表達(dá)。??器Ｇａｌ抗原含量表達(dá)??。??表１．小鼠臟器Ｇａｌ抗原表達(dá)景檢測(cè)結(jié)果??（ｎｘｌＯ１１?Ｇａｌ脾臟?心臟?肝臟?腎臟２４５．０８?±４８．５３?９３．０５±７．１７?２４．９１±４．８８?５８．５６±１７．８６鼠?０．８８?士０．１８?０．７４±０．３９?０．２５±０．１５?０．２０±０．０４?９９．６４?９９．２０?９８．９８?９９．６５相比，ＧＧＴＡ１?ＫＯ小鼠的主要臟器Ｇａｌ抗原含量降低率達(dá)９ＴＡ１是調(diào)控合成Ｇａｌ抗原的主要基因，ＧＧＴＡ１缺失可造成Ｇ失。??血紅細(xì)胞刺激的敏感性評(píng)價(jià)??


本文編號(hào)：3356955