目的:利用Crisper cas9技術(shù)及轉(zhuǎn)基因小鼠模型,獲得干細(xì)胞上YAP1敲除條件轉(zhuǎn)基因小鼠。通過對YAP1敲除轉(zhuǎn)基因小鼠發(fā)育成熟時前列腺的研究,探討YAP1通過調(diào)控正常前列腺干細(xì)胞維持干性及分化進(jìn)而影響前列腺正常生長發(fā)育的分子機(jī)制。一方面,進(jìn)一步了解正常前列腺生長發(fā)育分子機(jī)制,可能在未來為前列腺癌的防治提供新的方向;另一方面,進(jìn)一步探討YAP1蛋白的分子功能,為將來YAP1可能作為一個腫瘤防治的新靶點提供證據(jù)。方法:實驗主要為體內(nèi)實驗。我們選用CD133作為胚胎時期干細(xì)胞的標(biāo)志物。CD133作為干細(xì)胞標(biāo)記物,在胚胎及成人時期中樞神經(jīng)系統(tǒng)、腎、腸、泌尿生殖系統(tǒng)包括前列腺等都有表達(dá)。我們使用Cre-loxp系統(tǒng)及Crisper cas9技術(shù)獲得干細(xì)胞上YAP1敲除轉(zhuǎn)基因小鼠。通過雜交得到基因型為YAP1fl/fl,CD133-Cre ERT2的轉(zhuǎn)基因小鼠,進(jìn)而達(dá)到時間及組織特異性的YAP1敲除效果。我們在胚胎第17天（小鼠前列腺發(fā)育開始于妊娠17.5天）給予與雄性基因型為YAP1fl/fl雜交的基因型為YAP1fl/fl,CD133-Cre ERT2的妊娠母鼠Tamoxifen,即在小... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

轉(zhuǎn)基因小鼠模型雜交方案

圖 1.2：轉(zhuǎn)基因小鼠模型雜交方案二根據(jù)上述轉(zhuǎn)基因小鼠雜交方案，我們可以得到實驗組及對照組小鼠的基因型分組，如下圖所示：分組 基因型實驗組 YAPfl/fl，Cre對照組 YAP+/+，CreYAPfl/fl1.1.4.3 實驗方案經(jīng)過對小鼠前列腺正常發(fā)生發(fā)育過程的了解及 Cre-loxp 系統(tǒng)工作原理的認(rèn)識，我們選取了特異性時間點即小鼠前列腺發(fā)生的時間點（小鼠胚胎 17 天）為他莫西芬給藥時間點，小鼠前列腺生長發(fā)育基本成熟時間點（小鼠 6周齡）為小鼠犧牲點，實驗方案如下圖：

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文1.2 結(jié)果1.2.1實驗組及對照組小鼠的獲得1.2.1.1初代 F1小鼠的確定及 F2 代小鼠的獲得將購得的初代小鼠（YAPfl/fl及 CD133-Cre 小鼠）預(yù)先在動物房中飼養(yǎng) 10天左右以熟悉環(huán)境，然后合籠飼養(yǎng)以獲得 F2 代（YAPfl/+，CD133-Cre）。作為種鼠的 F1 代小鼠基因型檢測結(jié)果如下圖所示：


本文編號：3337719