目的:利用Crisper cas9技術(shù)及轉(zhuǎn)基因小鼠模型,獲得干細(xì)胞上YAP1敲除條件轉(zhuǎn)基因小鼠。通過(guò)對(duì)YAP1敲除轉(zhuǎn)基因小鼠發(fā)育成熟時(shí)前列腺的研究,探討YAP1通過(guò)調(diào)控正常前列腺干細(xì)胞維持干性及分化進(jìn)而影響前列腺正常生長(zhǎng)發(fā)育的分子機(jī)制。一方面,進(jìn)一步了解正常前列腺生長(zhǎng)發(fā)育分子機(jī)制,可能在未來(lái)為前列腺癌的防治提供新的方向;另一方面,進(jìn)一步探討YAP1蛋白的分子功能,為將來(lái)YAP1可能作為一個(gè)腫瘤防治的新靶點(diǎn)提供證據(jù)。方法:實(shí)驗(yàn)主要為體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。我們選用CD133作為胚胎時(shí)期干細(xì)胞的標(biāo)志物。CD133作為干細(xì)胞標(biāo)記物,在胚胎及成人時(shí)期中樞神經(jīng)系統(tǒng)、腎、腸、泌尿生殖系統(tǒng)包括前列腺等都有表達(dá)。我們使用Cre-loxp系統(tǒng)及Crisper cas9技術(shù)獲得干細(xì)胞上YAP1敲除轉(zhuǎn)基因小鼠。通過(guò)雜交得到基因型為YAP1fl/fl,CD133-Cre ERT2的轉(zhuǎn)基因小鼠,進(jìn)而達(dá)到時(shí)間及組織特異性的YAP1敲除效果。我們?cè)谂咛サ?7天（小鼠前列腺發(fā)育開(kāi)始于妊娠17.5天）給予與雄性基因型為YAP1fl/fl雜交的基因型為YAP1fl/fl,CD133-Cre ERT2的妊娠母鼠Tamoxifen,即在小... 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

轉(zhuǎn)基因小鼠模型雜交方案

圖 1.2：轉(zhuǎn)基因小鼠模型雜交方案二根據(jù)上述轉(zhuǎn)基因小鼠雜交方案，我們可以得到實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組小鼠的基因型分組，如下圖所示：分組 基因型實(shí)驗(yàn)組 YAPfl/fl，Cre對(duì)照組 YAP+/+，CreYAPfl/fl1.1.4.3 實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)過(guò)對(duì)小鼠前列腺正常發(fā)生發(fā)育過(guò)程的了解及 Cre-loxp 系統(tǒng)工作原理的認(rèn)識(shí)，我們選取了特異性時(shí)間點(diǎn)即小鼠前列腺發(fā)生的時(shí)間點(diǎn)（小鼠胚胎 17 天）為他莫西芬給藥時(shí)間點(diǎn)，小鼠前列腺生長(zhǎng)發(fā)育基本成熟時(shí)間點(diǎn)（小鼠 6周齡）為小鼠犧牲點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)方案如下圖：

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文1.2 結(jié)果1.2.1實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組小鼠的獲得1.2.1.1初代 F1小鼠的確定及 F2 代小鼠的獲得將購(gòu)得的初代小鼠（YAPfl/fl及 CD133-Cre 小鼠）預(yù)先在動(dòng)物房中飼養(yǎng) 10天左右以熟悉環(huán)境，然后合籠飼養(yǎng)以獲得 F2 代（YAPfl/+，CD133-Cre）。作為種鼠的 F1 代小鼠基因型檢測(cè)結(jié)果如下圖所示：


本文編號(hào)：3337719